附件：腫瘤標(biāo)志物類定量檢測(cè)試劑注冊(cè)審查指導(dǎo)原則（2023年修訂版）（2024年第1號(hào)）.doc

腫瘤標(biāo)志物類定量檢測(cè)試劑注冊(cè)審查
指導(dǎo)原則（2023年修訂版）

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)腫瘤標(biāo)志物類定量檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)腫瘤標(biāo)志物類定量檢測(cè)試劑的一般要求，注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用。若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供注冊(cè)申請(qǐng)人和技術(shù)審評(píng)人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評(píng)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

腫瘤標(biāo)志物類定量檢測(cè)試劑是指利用各種方法學(xué)對(duì)人血清、血漿或其他體液中的腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行體外定量分析的試劑。

從方法學(xué)考慮，本指導(dǎo)原則主要指利用基于抗原抗體反應(yīng)原理的免疫學(xué)方法對(duì)腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行定量檢測(cè)的體外診斷試劑，如酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光法等，而不包括組織受體檢測(cè)、生物化學(xué)方法、免疫組化染色法、分子生物學(xué)方法類檢測(cè)試劑，有利之處可參考執(zhí)行。

本指導(dǎo)原則僅適用于對(duì)惡性腫瘤患者進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)以輔助判斷疾病進(jìn)程或治療效果的定量檢測(cè)試劑注冊(cè)申請(qǐng)和變更注冊(cè)申請(qǐng)的情形，如產(chǎn)品用于其它用途,應(yīng)根據(jù)相關(guān)用途開(kāi)展相關(guān)臨床研究。本指導(dǎo)原則針對(duì)腫瘤標(biāo)志物類定量檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料中的部分內(nèi)容進(jìn)行撰寫，其他未盡事宜應(yīng)當(dāng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》等相關(guān)法規(guī)要求。

二、注冊(cè)審查要點(diǎn)

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法》及相關(guān)法規(guī)的要求，如甲胎蛋白檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）。

2.分類依據(jù)

根據(jù)《6840體外診斷試劑分類子目錄(2013版)》《體外診斷試劑分類規(guī)則》《國(guó)家藥監(jiān)局關(guān)于調(diào)整

3.其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報(bào)前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

綜述資料主要包括概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報(bào)產(chǎn)品上市歷史及其他需說(shuō)明的內(nèi)容。建議申請(qǐng)人對(duì)以下幾方面內(nèi)容進(jìn)行著重介紹：

1.概述

明確腫瘤標(biāo)志物類定量檢測(cè)試劑的通用名稱及確認(rèn)依據(jù)，明確產(chǎn)品的管理類別及分類編碼。

2.產(chǎn)品描述

詳述檢測(cè)原理、產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)、與同類和/或前代產(chǎn)品的比較等。與同類和/或前代產(chǎn)品的比較，應(yīng)著重從方法學(xué)、檢驗(yàn)原理、產(chǎn)品主要性能等方面詳細(xì)說(shuō)明申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

3.預(yù)期用途

詳述申報(bào)產(chǎn)品的預(yù)期用途，應(yīng)與管理類別具有一致性。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報(bào)告

1.1產(chǎn)品技術(shù)要求

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評(píng)價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)資料，結(jié)合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求編寫。作為第三類體外診斷試劑管理的腫瘤標(biāo)志物類定量檢測(cè)試劑，還應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材料以及生產(chǎn)工藝要求。

1.2檢驗(yàn)報(bào)告

有適用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的，技術(shù)要求中應(yīng)體現(xiàn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的相關(guān)要求并使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢驗(yàn)。

第三類體外診斷試劑應(yīng)當(dāng)提供三個(gè)不同生產(chǎn)批次產(chǎn)品的檢驗(yàn)報(bào)告。

2.分析性能研究

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)采用在符合質(zhì)量管理體系的環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行所有分析性能研究，包括具體研究方法、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。分析性能研究試驗(yàn)方法可參考《定量檢測(cè)體外診斷試劑分析性能評(píng)估注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》、美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)批準(zhǔn)指南（CLSI-EP）等國(guó)內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。

腫瘤標(biāo)志物類定量檢測(cè)試劑的分析性能一般包括樣本穩(wěn)定性，適用的樣本類型，校準(zhǔn)品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值，正確度，精密度，空白限、檢出限及定量限，分析特異性，高劑量鉤狀效應(yīng)，測(cè)量區(qū)間及可報(bào)告區(qū)間，反應(yīng)體系等。產(chǎn)品的準(zhǔn)確度與正確度和精密度有關(guān)。申請(qǐng)人應(yīng)設(shè)計(jì)合理的試驗(yàn)方案，對(duì)各項(xiàng)分析性能進(jìn)行充分評(píng)估。

2.1樣本穩(wěn)定性

樣本穩(wěn)定性一般包括樣本各種實(shí)際運(yùn)輸及儲(chǔ)存（常溫、冷藏和冷凍）條件下的保存期限驗(yàn)證，以確認(rèn)樣本的保存條件及保存時(shí)間?？梢栽诤侠淼臏囟确秶鷥?nèi)，每間隔一定的時(shí)間段即對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性。可冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行合理驗(yàn)證。

2.2適用的樣本類型

如果試劑適用于多種樣本類型（包括抗凝劑），應(yīng)采用合理方法評(píng)價(jià)每種樣本類型的適用性。對(duì)具有可比性的樣本類型，如血清和血漿樣本，可選擇具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義數(shù)量的樣本進(jìn)行樣本一致性的同源比對(duì)研究；對(duì)于不具有可比性的樣本類型，應(yīng)對(duì)每種樣本類型分別進(jìn)行分析性能評(píng)估。

如果樣本的采集、處理方式存在差別，例如適用不同采樣器、不同樣本保存液等處理方法，應(yīng)分析這些差別的潛在影響，并進(jìn)行針對(duì)性的分析性能驗(yàn)證。

2.3校準(zhǔn)品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值（如適用）

應(yīng)明確申報(bào)產(chǎn)品適用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。

如申報(bào)產(chǎn)品包括校準(zhǔn)品，應(yīng)當(dāng)提交溯源資料。

如申報(bào)產(chǎn)品包括質(zhì)控品，應(yīng)當(dāng)提交在所有適用機(jī)型上進(jìn)行賦值和驗(yàn)證的資料。

2.4正確度

正確度評(píng)價(jià)方法包括使用參考物質(zhì)的正確度評(píng)價(jià)、方法學(xué)比對(duì)、回收試驗(yàn)等方法，企業(yè)可根據(jù)實(shí)際情況選擇合理方法進(jìn)行研究。

2.4.1使用參考物質(zhì)的正確度評(píng)價(jià)

參考物質(zhì)的值可作為參考量值，用于評(píng)估試劑檢測(cè)結(jié)果的偏倚。推薦的參考物質(zhì)包括：具有互換性的有證參考物質(zhì)，公認(rèn)的參考品、標(biāo)準(zhǔn)品，參考測(cè)量程序賦值的臨床樣本。不可采用產(chǎn)品校準(zhǔn)品、申報(bào)試劑檢測(cè)系統(tǒng)定值的質(zhì)控品進(jìn)行正確度評(píng)價(jià)。

建議采用2～3個(gè)水平的參考物質(zhì)，代表試劑測(cè)量區(qū)間內(nèi)的不同濃度，其中應(yīng)包括參考區(qū)間上限附近的濃度。進(jìn)行多次重復(fù)檢測(cè)，采用檢測(cè)結(jié)果平均值與參考量值計(jì)算偏倚。如參考物質(zhì)只有1個(gè)水平，且無(wú)合理稀釋方法，亦可在說(shuō)明原因的基礎(chǔ)上，僅采用1個(gè)水平的參考物質(zhì)進(jìn)行正確度評(píng)價(jià)。

2.4.2方法學(xué)比對(duì)

采用申報(bào)試劑與合理的比較測(cè)量程序同時(shí)檢測(cè)臨床樣本，通過(guò)兩者的比對(duì)研究和偏倚估計(jì)，進(jìn)行申報(bào)試劑的正確度評(píng)價(jià)。比較測(cè)量程序可選擇同類試劑或者參考測(cè)量程序。臨床樣本的濃度水平應(yīng)覆蓋申報(bào)試劑的測(cè)量區(qū)間。在性能建立時(shí)，建議對(duì)每個(gè)樣本重復(fù)檢測(cè)，以平均值或中位數(shù)進(jìn)行回歸分析，并評(píng)價(jià)參考區(qū)間上限濃度的偏倚。在實(shí)施方法學(xué)比對(duì)前，應(yīng)分別對(duì)申報(bào)試劑和比較測(cè)量程序進(jìn)行初步評(píng)估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)。

2.4.3回收試驗(yàn)

對(duì)于缺少具有互換性的有證參考物質(zhì)，公認(rèn)的參考品、標(biāo)準(zhǔn)品，及參考測(cè)量程序，且無(wú)已上市同類試劑，同時(shí)可獲得與被測(cè)量一致的純品的試劑，可采用回收試驗(yàn)進(jìn)行正確度評(píng)價(jià)。

使用純品配制標(biāo)準(zhǔn)溶液A時(shí)，宜采用重量法，以減小配制過(guò)程中的不確定度。應(yīng)注意基質(zhì)效應(yīng)，盡量采用與臨床待測(cè)樣本接近的基質(zhì)。選擇合適濃度的臨床樣本作為B液。將不同體積量的標(biāo)準(zhǔn)溶液A加入樣本B中，配制成至少3個(gè)不同濃度的回收樣品，每個(gè)濃度重復(fù)檢測(cè)3次，計(jì)算平均回收率。

需注意，一般標(biāo)準(zhǔn)溶液的加入體積不超過(guò)總體積的10%。至少一份回收樣本的分析物濃度在參考區(qū)間上限附近。

2.5精密度

應(yīng)根據(jù)各測(cè)量條件對(duì)檢測(cè)結(jié)果影響程度的分析，設(shè)計(jì)合理的精密度試驗(yàn)方案進(jìn)行評(píng)價(jià)，包括重復(fù)性、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度、實(shí)驗(yàn)室間精密度和批間精密度，應(yīng)制定合理的精密度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等。

精密度研究用樣本一般為臨床實(shí)際檢測(cè)樣本或其混合物。樣本濃度一般包括測(cè)量區(qū)間高、中、低在內(nèi)的3～5個(gè)水平，應(yīng)有參考區(qū)間上限濃度附近的樣本。

2.6空白限、檢出限及定量限

腫瘤標(biāo)志物定量檢測(cè)體外診斷試劑對(duì)樣本濃度下限的檢出能力指標(biāo)包括空白限（LoB）、檢出限（LoD）及定量限（LoQ）。

2.6.1空白限、檢出限及定量限的建立

LoB、LoD、LoQ的建立需分別選擇多個(gè)獨(dú)立的樣本（空白樣本、低濃度水平樣本、已知濃度的低水平樣本），在多天內(nèi)進(jìn)行研究。

LoB一般由多個(gè)獨(dú)立的空白樣本（無(wú)分析物）的檢測(cè)結(jié)果計(jì)算獲得。

LoD一般由多個(gè)獨(dú)立的低濃度（含有分析物）樣本的檢測(cè)結(jié)果，結(jié)合LoB進(jìn)行計(jì)算獲得。

應(yīng)根據(jù)具體產(chǎn)品的原理、檢測(cè)結(jié)果差異和數(shù)據(jù)分布，選擇合理的試驗(yàn)方案和統(tǒng)計(jì)分析方法。

LoQ應(yīng)滿足預(yù)設(shè)準(zhǔn)確度指標(biāo)，即考慮偏倚和精密度的要求。偏倚可通過(guò)檢測(cè)具有可接受參考量值的樣本進(jìn)行評(píng)估，所以需獲得已知濃度的低水平樣本，例如本文2.4.1中所述參考物質(zhì)。如涉及將樣本稀釋至低濃度水平，應(yīng)確保稀釋過(guò)程不引起明顯的基質(zhì)效應(yīng)，且在低濃度區(qū)間呈線性。精密度的評(píng)估可根據(jù)檢測(cè)試劑及其應(yīng)用確定其測(cè)量條件，一般應(yīng)至少包括重復(fù)性和日間精密度。

對(duì)于無(wú)法獲得參考物質(zhì)的腫瘤標(biāo)志物，如無(wú)法在合適的低水平分析物濃度下確定偏倚，可采用其他合理的替代方法評(píng)估LoQ，例如研究試劑精密度達(dá)到特定要求時(shí)的最低分析物濃度。建議僅在無(wú)法確定偏倚時(shí)采用替代方法，并且應(yīng)設(shè)置較為嚴(yán)格的精密度要求。

2.6.2空白限、檢出限及定量限的驗(yàn)證

LoB、LoD、LoQ的驗(yàn)證需各選擇至少2個(gè)樣本（空白樣本、檢出限濃度樣本、定量限濃度樣本），在多天內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)。每個(gè)試劑批次至少需要獲得20個(gè)檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算符合要求的檢測(cè)結(jié)果比例，如果比例符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求/預(yù)設(shè)的臨界值，則2.6.1建立的LoB、LoD、LoQ得到驗(yàn)證。企業(yè)可參考相關(guān)文件，根據(jù)申報(bào)產(chǎn)品特性制定檢測(cè)結(jié)果比例要求。一般來(lái)講，LoB總是低于LoD，而LoD則低于或等于LoQ。

2.7分析特異性

分析特異性受干擾和交叉反應(yīng)的影響。申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn),分析待測(cè)樣本中及試劑使用過(guò)程中潛在的干擾物質(zhì)和交叉反應(yīng)物質(zhì)。

2.7.1干擾試驗(yàn)

可采用添加干擾物質(zhì)的樣本進(jìn)行研究，如果干擾物質(zhì)的基質(zhì)與適用樣本不同，則添加量宜少于總體積的5%（溶解度允許條件下），并盡量使用接近體內(nèi)循環(huán)形式的樣品或純品。

比較添加與未添加高濃度干擾物質(zhì)的樣本檢測(cè)結(jié)果的差異。如果差異超出接受范圍或?qū)εR床有顯著性影響，可確認(rèn)該物質(zhì)為干擾物質(zhì)，應(yīng)評(píng)估該干擾物質(zhì)濃度與干擾程度之間的關(guān)系；如果差異在接受范圍內(nèi)或?qū)εR床無(wú)顯著性影響，可認(rèn)為該濃度的物質(zhì)不產(chǎn)生干擾，應(yīng)明確不產(chǎn)生干擾的物質(zhì)濃度上限。

在對(duì)可疑干擾物質(zhì)進(jìn)行干擾篩查或驗(yàn)證時(shí)，建議采用至少2個(gè)分析物水平的樣本，應(yīng)包括參考區(qū)間上限附近濃度的樣本。

在評(píng)估干擾物質(zhì)濃度與干擾程度之間關(guān)系時(shí)，可適當(dāng)增加樣本數(shù)量，納入更多分析物水平的樣本。

申請(qǐng)人除按照上述方法采用添加干擾物質(zhì)的樣本進(jìn)行研究外，亦可采用有代表性的患者樣本，通過(guò)申報(bào)試劑與不受該干擾物影響的測(cè)量程序檢測(cè)結(jié)果間的比對(duì)，進(jìn)行干擾物質(zhì)研究。

常見(jiàn)的內(nèi)源性干擾物質(zhì)包括溶血（血紅蛋白）、高脂、高膽紅素、自身抗體(如RF、ANA)、生物素、人抗鼠抗體，近期使用的抗腫瘤藥物（如某些生物制劑），應(yīng)研究其對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

2.7.2交叉反應(yīng)

建議選擇高濃度的交叉反應(yīng)物質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證，并應(yīng)提供用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證物質(zhì)的來(lái)源、制備、濃度等基本信息。

常見(jiàn)的交叉反應(yīng)物質(zhì)包括樣本中存在的某些與待測(cè)抗原有相似化學(xué)結(jié)構(gòu)或抗原表位的分子，可能與試劑中的單克隆抗體發(fā)生交叉反應(yīng)而影響檢測(cè)結(jié)果的物質(zhì)，如易共存的其他腫瘤標(biāo)志物抗原、某些激素等，可根據(jù)產(chǎn)品特性，選擇交叉物質(zhì)進(jìn)行研究。

企業(yè)可自行根據(jù)產(chǎn)品原理，選擇與申報(bào)產(chǎn)品臨床適應(yīng)證相關(guān)的藥物進(jìn)行研究，如可能與分析物發(fā)生作用的藥物、影響反應(yīng)體系的藥物等。

2.8高劑量鉤狀效應(yīng)

檢測(cè)含有極高濃度的待測(cè)抗體/抗原的樣本時(shí)，飽和反應(yīng)可能導(dǎo)致檢測(cè)濃度值低于真實(shí)值。建議對(duì)多個(gè)含有高濃度分析物的樣本進(jìn)行梯度稀釋后由低濃度至高濃度檢測(cè)，每個(gè)梯度的稀釋液重復(fù)多份進(jìn)行檢測(cè)，明確不產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)的最高分析物濃度。

2.9測(cè)量區(qū)間及可報(bào)告區(qū)間

2.9.1線性區(qū)間及測(cè)量區(qū)間

線性區(qū)間的研究，需采用高值和零濃度/低值樣本配制一系列不同濃度的樣本。樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實(shí)際檢測(cè)的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測(cè)定上限的混合人體樣本，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對(duì)樣本基質(zhì)的影響。

當(dāng)建立試劑的線性區(qū)間時(shí)，需配制較預(yù)期線性區(qū)間更寬的9個(gè)左右不同濃度的樣本（不包括零濃度樣本），每個(gè)樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測(cè)，根據(jù)可接受線性偏差和各濃度的重復(fù)性，確定檢測(cè)次數(shù)。采用重復(fù)檢測(cè)均值和預(yù)期值進(jìn)行直線回歸分析，建議采用加權(quán)最小二乘回歸等分析方法，提供散點(diǎn)圖、線性回歸方程、線性相關(guān)系數(shù)（r）及線性偏差，判斷結(jié)果是否滿足可接受標(biāo)準(zhǔn)。

當(dāng)驗(yàn)證試劑的線性區(qū)間時(shí)，需配制覆蓋整個(gè)線性區(qū)間的至少5個(gè)不同濃度的樣本，每個(gè)樣本至少重復(fù)檢測(cè)2次。

測(cè)量區(qū)間，也稱分析測(cè)量區(qū)間，在該區(qū)間內(nèi)，臨床樣本在未經(jīng)稀釋、濃縮，或非常規(guī)測(cè)量程序中步驟的其他前處理情況下，檢測(cè)結(jié)果的線性偏差、不精密度和偏倚均在可接受范圍內(nèi)。測(cè)量區(qū)間下限為定量限，線性區(qū)間包含測(cè)量區(qū)間。

2.9.2可報(bào)告區(qū)間

如對(duì)超出測(cè)量區(qū)間濃度的樣本可進(jìn)行稀釋后檢測(cè)，應(yīng)研究合適的稀釋液和稀釋倍數(shù)，從而確定試劑的可報(bào)告區(qū)間。

2.10其他需注意問(wèn)題

如果試劑適用不同的機(jī)型，需要在不同機(jī)型上分別進(jìn)行分析性能評(píng)估。應(yīng)采用一個(gè)或多個(gè)機(jī)型，進(jìn)行充分的試劑分析性能建立研究，對(duì)于其他機(jī)型，應(yīng)分析各適用機(jī)型的工作原理、檢測(cè)方法、反應(yīng)條件控制、信號(hào)處理等，如基本相同，可基于風(fēng)險(xiǎn)分析對(duì)已建立的分析性能指標(biāo)進(jìn)行合理驗(yàn)證。所有適用機(jī)型驗(yàn)證的分析性能應(yīng)基本一致，如不同機(jī)型對(duì)某一檢測(cè)項(xiàng)目的某一分析性能存在差異，應(yīng)針對(duì)該差異采用不同機(jī)型進(jìn)行充分的分析性能建立研究。

2.11反應(yīng)體系研究

管理類別為第三類的腫瘤標(biāo)志物定量檢測(cè)試劑應(yīng)提交反應(yīng)體系研究資料，第二類試劑由申請(qǐng)人保存，技術(shù)審評(píng)需要時(shí)應(yīng)提交。

2.11.1確定抗原抗體反應(yīng)條件（溫度、時(shí)間等）的研究資料。

2.11.2確定反應(yīng)所需物質(zhì)用量（校準(zhǔn)品、樣本、包被物、酶標(biāo)物、底物等）的研究資料；如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測(cè)，申請(qǐng)人還應(yīng)對(duì)樣本稀釋液及其用量、其他必要的處理方法等進(jìn)行研究。

2.11.3底物（發(fā)光或變色）的最適條件研究。

2.11.4其他：如清洗次數(shù)（如適用）、基質(zhì)液的選擇、樣本稀釋等。

2.11.5不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。

3.穩(wěn)定性研究

穩(wěn)定性研究主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（貨架有效期）、使用穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性等，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體方法及過(guò)程。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

4.參考區(qū)間研究

詳述參考區(qū)間建立或驗(yàn)證的方法或依據(jù)，明確研究采用的樣本來(lái)源及信息、詳細(xì)的試驗(yàn)資料、統(tǒng)計(jì)方法等。樣本選擇應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的預(yù)期用途，考慮不同年齡、性別、地域等因素的影響，盡可能考慮樣本來(lái)源的多樣性、代表性。使用適用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法確定擬申報(bào)試劑的參考區(qū)間，可參考《體外診斷試劑參考區(qū)間確定注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》進(jìn)行研究。

5.其他資料

管理類別為第三類的腫瘤標(biāo)志物定量檢測(cè)試劑應(yīng)提交主要原材料及生產(chǎn)工藝研究資料，第二類試劑由申請(qǐng)人保存，技術(shù)審評(píng)需要時(shí)應(yīng)提交。

5.1主要原材料研究資料

此類產(chǎn)品的主要原材料研究包括抗原、抗體、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品等資料，應(yīng)提供主要原材料的選擇與來(lái)源、制備、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)研究資料。

5.1.1抗原或抗體

詳述抗原/抗體所針對(duì)的抗原表位、抗原/抗體制備所用免疫原以及確定該抗原/抗體作為主要原材料的依據(jù)，提交抗原/抗體來(lái)源、制備、篩選、鑒定及質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)（可包括外觀、蛋白濃度、純度、分子量、效價(jià)、功能性試驗(yàn)等）等詳細(xì)試驗(yàn)資料。

5.1.2其他

除上述原材料外，產(chǎn)品中包含的其他原材料，如磁微粒、BSA等，均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證并提交相關(guān)資料。明確供應(yīng)商和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

5.1.3對(duì)于校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，還應(yīng)列明校準(zhǔn)品、質(zhì)控品的成分、基質(zhì)及各水平濃度。

5.2生產(chǎn)工藝研究資料

5.2.1主要生產(chǎn)工藝介紹，可以圖表方式表示。

5.2.2反應(yīng)原理（如雙抗體夾心法）介紹。

5.2.3固相載體的包被、顯色（發(fā)光）系統(tǒng)的確定、結(jié)合物的制備等研究資料。

（四）臨床評(píng)價(jià)資料

屬于《免于臨床試驗(yàn)體外診斷試劑目錄》的腫瘤標(biāo)志物定量檢測(cè)試劑，可通過(guò)同品種方法學(xué)比對(duì)研究進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)，評(píng)價(jià)方法可參照《免于臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑臨床評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》相關(guān)內(nèi)容，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床評(píng)價(jià)應(yīng)符合更新后的要求。

不屬于《免于臨床試驗(yàn)體外診斷試劑目錄》的腫瘤標(biāo)志物定量檢測(cè)試劑，應(yīng)通過(guò)臨床試驗(yàn)方式進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)，臨床評(píng)價(jià)資料應(yīng)符合《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求。

對(duì)于有已上市同類產(chǎn)品的臨床試驗(yàn)，應(yīng)選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，進(jìn)行試驗(yàn)體外診斷試劑與對(duì)比試劑的比對(duì)研究，證明與已上市產(chǎn)品的一致性。臨床研究的受試人群應(yīng)為該產(chǎn)品的預(yù)期人群，具有與該標(biāo)志物相關(guān)惡性腫瘤的臨床背景信息。對(duì)于定量檢測(cè)，應(yīng)針對(duì)主要評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行樣本量估算。臨床試驗(yàn)方案中建議同時(shí)給出與所選定評(píng)價(jià)指標(biāo)對(duì)應(yīng)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，并提供確定依據(jù)。在線性范圍內(nèi)的各個(gè)濃度水平均應(yīng)有一定量的入組樣本例數(shù)。定量檢測(cè)的體外診斷試劑臨床試驗(yàn)評(píng)價(jià)指標(biāo)通常包括回歸分析的回歸系數(shù)、截距、相關(guān)系數(shù)和決定系數(shù)等。采用Bland-Altman法，計(jì)算一致性限度，評(píng)價(jià)兩種檢測(cè)結(jié)果的一致性。一致性限度應(yīng)在臨床所能接受的界值范圍內(nèi)。

對(duì)于全新腫瘤標(biāo)志物定量檢測(cè)的臨床試驗(yàn)，應(yīng)包含不少于100例受試者的縱向研究，建議參考《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》進(jìn)行研究。

（五）產(chǎn)品說(shuō)明書和標(biāo)簽樣稿

產(chǎn)品說(shuō)明書格式應(yīng)滿足《體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說(shuō)明書中技術(shù)內(nèi)容應(yīng)與注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，應(yīng)以規(guī)范格式進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。腫瘤標(biāo)志物定量檢測(cè)試劑說(shuō)明書編寫應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注以下內(nèi)容：

1.【預(yù)期用途】

1.1首段明確申報(bào)產(chǎn)品用于體外定量檢測(cè)血清、血漿和/或其他體液中的某腫瘤標(biāo)志物濃度，主要用于對(duì)惡性腫瘤患者進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)以輔助判斷疾病進(jìn)程或治療效果，不能作為惡性腫瘤早期診斷或確診的依據(jù)，不用于普通人群的腫瘤篩查。

1.2簡(jiǎn)單介紹該腫瘤標(biāo)志物的特征，如分子結(jié)構(gòu)、分子量、產(chǎn)生和代謝主要途徑、半衰期等。

1.3腫瘤標(biāo)志物水平升高常見(jiàn)于哪些良惡性疾病，組織/器官特異性如何，其升高或降低可能有哪些醫(yī)學(xué)解釋。

1.4預(yù)期用途項(xiàng)下的背景信息應(yīng)與預(yù)期用途一致，如申報(bào)產(chǎn)品預(yù)期用途不包含“診斷”“篩查”用途，則不得出現(xiàn)“診斷”“篩查”等誤導(dǎo)性表述。

2.【主要組成成分】

2.1說(shuō)明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量及各組分主要成分的比例或濃度等信息，如果對(duì)于正確的操作很重要，應(yīng)提供其生物學(xué)來(lái)源、活性及其他特性；如適用，明確說(shuō)明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。

2.2試劑盒內(nèi)如包含校準(zhǔn)品和/或質(zhì)控品，應(yīng)說(shuō)明其主要組成成分及其生物學(xué)來(lái)源，校準(zhǔn)品應(yīng)注明其定值及溯源性，質(zhì)控品應(yīng)有合適的靶值范圍，如靶值范圍為批特異，可注明批特異，并附單獨(dú)的靶值。

2.3試劑盒中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑的名稱、貨號(hào)及其他相關(guān)信息。

3.【樣本要求】

重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：樣本類型、處理、保存期限、保存條件（短期、長(zhǎng)期）等。如有血漿樣本，應(yīng)注明對(duì)抗凝劑的要求。冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否需恢復(fù)室溫，凍融次數(shù)。應(yīng)詳細(xì)描述對(duì)特殊體液標(biāo)本的采集條件、保存液、容器等可能影響檢測(cè)結(jié)果的要求。

4.【適用機(jī)型】

說(shuō)明適用的儀器及其型號(hào)，并提供與儀器有關(guān)的信息以便用戶能夠正確選擇使用。

5.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說(shuō)明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：

5.1試劑使用方式、注意事項(xiàng)。

5.2試驗(yàn)條件：溫度、時(shí)間、儀器波長(zhǎng)等以及試驗(yàn)過(guò)程中的注意事項(xiàng)。

5.3校準(zhǔn)：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項(xiàng)、校準(zhǔn)曲線的繪制（如適用）。

對(duì)需專用儀器的產(chǎn)品，應(yīng)注明推薦的儀器校準(zhǔn)周期。

5.4質(zhì)量控制：質(zhì)控品的使用方法、對(duì)質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等；建議在本部分注明以下字樣：如果質(zhì)控結(jié)果與預(yù)期不符，提示檢測(cè)結(jié)果不可靠，不應(yīng)出具檢測(cè)報(bào)告。如質(zhì)控不合格應(yīng)提供相關(guān)的解決方案。

6.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】詳述以下性能指標(biāo)：

6.1空白限、檢出限和定量限：明確空白限、檢出限和定量限，簡(jiǎn)要介紹確定方法。

6.2測(cè)量區(qū)間：說(shuō)明本試劑盒可達(dá)到的線性區(qū)間、測(cè)量區(qū)間或可報(bào)告區(qū)間，儀器報(bào)告結(jié)果的高限和低限要求（如有）等。

6.3精密度：簡(jiǎn)要說(shuō)明精密度評(píng)價(jià)的方法和結(jié)果。

6.4特異性：明確有關(guān)干擾或交叉反應(yīng)的研究結(jié)果。常見(jiàn)的特異性研究包括：對(duì)溶血、高脂、黃疸等干擾因子研究（結(jié)果應(yīng)量化表示，禁用輕度、嚴(yán)重等模糊表述），有關(guān)自身抗體、易共存或結(jié)構(gòu)相似的不同腫瘤標(biāo)志物間、抗腫瘤藥物特異性（如某些生物制劑）的研究等，如未進(jìn)行相關(guān)研究也應(yīng)提供相關(guān)警示說(shuō)明。

6.5鉤狀效應(yīng)：說(shuō)明不會(huì)產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)的濃度上限或相關(guān)研究，如需稀釋，應(yīng)注明對(duì)稀釋液的要求、最佳或最大稀釋比例。

6.6正確度：簡(jiǎn)要介紹正確度所采用的方法和結(jié)果。

6.7概括描述臨床評(píng)價(jià)（包括免于臨床試驗(yàn)的臨床評(píng)價(jià)和臨床試驗(yàn)）的方法和結(jié)果。

6.8建議采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)濃度單位表示腫瘤標(biāo)志物濃度，如涉及不同單位，如U/mL、ng/mL、mg/L等，應(yīng)注明不同單位間的換算關(guān)系。

7.【參考區(qū)間】

應(yīng)注明常用樣本類型的參考區(qū)間，簡(jiǎn)單介紹建立和/或驗(yàn)證該參考區(qū)間所選健康人群的基本信息，包括：樣本量、參考人群特征（如性別、年齡、種族等）和采用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及年齡等差異，建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的參考區(qū)間”。

8.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

8.1本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，對(duì)患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

8.2由于方法學(xué)或抗體特異性等原因，使用不同生產(chǎn)商的試劑對(duì)同一份樣本進(jìn)行腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)可能會(huì)得到不同的檢測(cè)結(jié)果，因此，在腫瘤監(jiān)測(cè)過(guò)程中，用不同試劑檢測(cè)所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋；建議實(shí)驗(yàn)室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測(cè)報(bào)告中注明所用試劑特征。系列監(jiān)測(cè)中如果改變?cè)噭╊愋?，則應(yīng)進(jìn)行額外的連續(xù)性檢測(cè)并與原有試劑結(jié)果進(jìn)行平行比較以重新確定基線值。

8.3有關(guān)人源組分的警告，如：試劑盒內(nèi)的質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或其他人源組分，雖已經(jīng)通過(guò)了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項(xiàng)目的檢測(cè)，但截至目前，沒(méi)有任何一項(xiàng)檢測(cè)可以確保絕對(duì)安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對(duì)待。

8.4樣本：對(duì)所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對(duì)待。

8.5其他有關(guān)不同腫瘤標(biāo)志物特性的注意事項(xiàng)。

三、名詞解釋

1.腫瘤標(biāo)志物：是指在惡性腫瘤發(fā)生和增殖過(guò)程中,由腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生或機(jī)體反應(yīng)而異常產(chǎn)生和/或升高的，反映腫瘤細(xì)胞特性的一類物質(zhì)。

2.正確度：指無(wú)窮多次重復(fù)測(cè)量所得量值的平均值與一個(gè)參考量值間的一致程度。

3.精密度：在規(guī)定條件下，相互獨(dú)立的測(cè)試結(jié)果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法得到的測(cè)量不精密度的數(shù)字形式表示，如標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（CV）。

4.空白限：指測(cè)量空白樣本時(shí)可能觀察到的最高測(cè)量結(jié)果。

5.檢出限：由給定測(cè)量程序得到的測(cè)得量值，對(duì)于此值，在給定聲稱物質(zhì)中存在某成分的誤判概率為α?xí)r，聲稱不存在該成分的誤判概率為β。

6.定量限：指達(dá)到預(yù)設(shè)準(zhǔn)確度要求時(shí)可測(cè)量的最低分析物濃度。

7.線性：指給出與樣品中被測(cè)量的值直接成比例的測(cè)得量值的能力。

8.線性區(qū)間：在這個(gè)區(qū)間內(nèi)，測(cè)量結(jié)果充分地符合一條合適的直線。

9.干擾：是由一個(gè)影響量引起的測(cè)量的系統(tǒng)效應(yīng)，該影響量自身不在測(cè)量系統(tǒng)中產(chǎn)生信號(hào)，但它會(huì)引起示值的增加或減少。

10.交叉反應(yīng)：指不是分析物的物質(zhì)與試劑反應(yīng)的程度。

11.高劑量鉤狀效應(yīng)：是指在免疫化學(xué)測(cè)量程序中由相對(duì)抗體濃度抗原濃度過(guò)量或相對(duì)抗原濃度抗體濃度過(guò)量時(shí)的抗原-抗體免疫復(fù)合物減少而引起的負(fù)偏倚。

四、參考文獻(xiàn)

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[2]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告.國(guó)家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第122號(hào)[Z].

[3]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.關(guān)于發(fā)布免于臨床試驗(yàn)體外診斷試劑目錄的通告.國(guó)家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第74號(hào)[Z].

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[5]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.體外診斷試劑參考區(qū)間確定注冊(cè)審查指導(dǎo)原則.國(guó)家藥監(jiān)局器審中心通告2022年第36號(hào).[Z]

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信息（標(biāo)示）第1部分：術(shù)語(yǔ)、定義和通用要求[S].

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