附件：堿性磷酸酶測定試劑注冊審查指導(dǎo)原則（2024修訂版）（2024年第19號）.doc

堿性磷酸酶測定試劑注冊審查指導(dǎo)原則
（2024年修訂版）

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）測定試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對堿性磷酸酶測定試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供注冊申請人和技術(shù)審評人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于以分光光度法為基本原理對人血清或血漿中堿性磷酸酶活性進(jìn)行體外定量檢測的試劑。

從方法學(xué)考慮，本指導(dǎo)原則主要指以堿性磷酸酶水解底物引起特定產(chǎn)物的吸光度的改變，對堿性磷酸酶活性進(jìn)行定量檢測的體外診斷試劑，不包括干化學(xué)、酶聯(lián)免疫及金標(biāo)類檢測試劑。對于其他方法學(xué)的堿性磷酸酶測試劑注冊可參照本指導(dǎo)原則，但應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用。

本指導(dǎo)原則不適用于單獨申請注冊的堿性磷酸酶校準(zhǔn)品和堿性磷酸酶質(zhì)控品。

二、注冊審查要點

注冊申報資料的撰寫應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊申報資料要求及說明》的相關(guān)要求。

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品名稱一般由三部分組成。第一部分：被測物質(zhì)名稱，如堿性磷酸酶；第二部分：用途，如測定試劑盒；第三部分：方法或者原理，如NPP底物-AMP緩沖液法等，本部分應(yīng)當(dāng)在括號中列出。

2.分類依據(jù)

根據(jù)2013版《體外診斷試劑分類子目錄》，堿性磷酸酶測定試劑產(chǎn)品類別為：Ⅱ-4 用于酶類檢測的試劑，管理類別為二類，分類編碼為6840。

3.注冊單元劃分

按照《醫(yī)療器械注冊單元劃分指導(dǎo)原則》對注冊單元劃分。如包含不同的包裝規(guī)格，不同規(guī)格間僅試劑組分裝量或檢測數(shù)有差異，原則上劃分為同一注冊單元；如包含不同的包裝規(guī)格，不同規(guī)格間除試劑裝量或檢測數(shù)的差異外，適用于不同的儀器機(jī)型，原則上劃分為同一注冊單元。校準(zhǔn)品、質(zhì)控品可以與配合使用的堿性磷酸酶測定試劑合并申請注冊，也可以單獨申請注冊。

4.其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

主要包括產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報產(chǎn)品上市歷史等內(nèi)容。其中，需注意以下內(nèi)容：

1.產(chǎn)品描述

1.1產(chǎn)品綜述

描述產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理，產(chǎn)品組成，原材料的來源及制備方法，主要生產(chǎn)工藝，檢驗方法，校準(zhǔn)品（如有）的制備方法及溯源情況、定值情況，質(zhì)控品（如有）的制備方法及賦值情況等。

1.2與同類和/或前代產(chǎn)品的比較

應(yīng)著重從技術(shù)原理、預(yù)期用途、使用方法、性能指標(biāo)、臨床應(yīng)用情況等方面寫明擬申報產(chǎn)品與境內(nèi)、外已上市同類產(chǎn)品和/或前代產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

2.預(yù)期用途

產(chǎn)品用于體外定量檢測血清或血漿中的堿性磷酸酶的活性。應(yīng)明確具體的樣本類型，適用的樣本類型應(yīng)結(jié)合實際的分析性能研究及臨床研究情況進(jìn)行確認(rèn)。說明堿性磷酸酶的生物學(xué)特征、結(jié)構(gòu)與功能，在體內(nèi)正常和病理狀態(tài)下的代謝途徑和存在形式。與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)證背景情況，如臨床適應(yīng)證的發(fā)生率、易感人群等，相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等。目標(biāo)適用人群的相關(guān)信息等。

應(yīng)當(dāng)明確產(chǎn)品預(yù)期使用者和預(yù)期使用環(huán)境。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品風(fēng)險管理資料

參照GB/T 42062《醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》等相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行產(chǎn)品風(fēng)險管理活動。申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié)，從產(chǎn)品設(shè)計開發(fā)、預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險的估計進(jìn)行風(fēng)險分析，綜合評價產(chǎn)品風(fēng)險可接受程度，形成風(fēng)險管理資料。

申請人應(yīng)根據(jù)堿性磷酸酶測定試劑自身的特點制定風(fēng)險可接受標(biāo)準(zhǔn)，確保產(chǎn)品滿足臨床需要。風(fēng)險分析可考慮以下內(nèi)容：預(yù)期用途錯誤包括：設(shè)計開始時未設(shè)定預(yù)期分析物、未作適用機(jī)型驗證、未針對特定的樣本類型驗證。性能特征失效包括：精密度失效、準(zhǔn)確度失效、非特異性、穩(wěn)定性失效、測量范圍失效、定量失效、量值溯源失效、校準(zhǔn)失效。不正確的結(jié)果包括：配方錯誤、采購的原料未能達(dá)到設(shè)計要求的性能、原材料儲存條件不正確、使用了過期的原材料、反應(yīng)體系不正確、試劑與包裝材料不相容?？赡艿氖褂缅e誤包括：生產(chǎn)者未按照生產(chǎn)流程操作，檢驗者未按照原料、半成品、成品檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作，裝配過程組分、標(biāo)簽、說明書等漏裝或誤裝，成品儲存或運輸不當(dāng)，客戶未參照產(chǎn)品說明書設(shè)置參數(shù)或使用。與安全性有關(guān)的特征包括：有毒化學(xué)試劑的化學(xué)污染、樣本的潛在生物污染、不可回收包裝或塑料的環(huán)境污染。

2.體外診斷試劑安全和性能基本原則清單

說明產(chǎn)品符合《體外診斷試劑安全和性能基本原則清單》各項適用要求所采用的方法，以及證明其符合性的文件。對于其中不適用的各項要求，應(yīng)當(dāng)說明理由。

對于包含在產(chǎn)品注冊申報資料中的文件，應(yīng)當(dāng)說明其在申報資料中的具體位置；對于未包含在產(chǎn)品注冊申報資料中的文件，應(yīng)當(dāng)注明該證據(jù)文件名稱及其在質(zhì)量管理體系文件中的編號以備查。

3.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗報告

申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期臨床評價等結(jié)果、國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的有關(guān)要求，進(jìn)行產(chǎn)品技術(shù)要求編寫。明確保證產(chǎn)品安全、有效、質(zhì)量可控的各項性能指標(biāo)和檢驗方法。

3.1適用的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)

產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)符合適用的強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)。對于強(qiáng)制性行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，若申報產(chǎn)品結(jié)構(gòu)特征、技術(shù)原理、預(yù)期用途、使用方式等與強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的適用范圍不一致，申請人應(yīng)當(dāng)提出不適用強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的說明，并提供經(jīng)驗證的證明性資料。

3.2.產(chǎn)品技術(shù)要求

3.2.1主要性能指標(biāo)

堿性磷酸酶測定試劑作為定量檢測試劑主要包括以下性能指標(biāo)：試劑的外觀、裝量、空白吸光度、空白吸光度變化率、分析靈敏度、線性區(qū)間、精密度、準(zhǔn)確度等，如試劑盒內(nèi)包含校準(zhǔn)品和/或質(zhì)控品，應(yīng)至少包含校準(zhǔn)品的正確度、均勻性等，質(zhì)控品的預(yù)期結(jié)果、均勻性等。產(chǎn)品技術(shù)要求可參照YY/T 1234《堿性磷酸酶測定試劑（盒）（NPP底物-AMP緩沖液法）》、YY/T 1549《生化分析儀用校準(zhǔn)物》（如適用）、YY/T 1662《生化分析儀用質(zhì)控物》（如適用）的要求。

具體產(chǎn)品的性能指標(biāo)需結(jié)合方法學(xué)本身特性，確定其性能指標(biāo)或者提供此指標(biāo)不適用的說明。

3.2.2檢驗方法

產(chǎn)品的檢驗方法需根據(jù)技術(shù)性能指標(biāo)設(shè)定，檢驗方法需優(yōu)先采用公認(rèn)的或已頒布的標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法；自建檢驗方法需提供相應(yīng)的方法學(xué)依據(jù)及理論基礎(chǔ)，同時保證檢驗方法具有可操作性和可重現(xiàn)性，必要時可附相應(yīng)圖示進(jìn)行說明，文本較大的可以附錄形式提供。

3.3產(chǎn)品檢驗報告

在保證產(chǎn)品原材料和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定可靠的基礎(chǔ)上，采用在符合醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系相關(guān)要求的條件下生產(chǎn)的產(chǎn)品進(jìn)行檢驗。堿性磷酸酶產(chǎn)品目前尚無注冊檢驗用體外診斷試劑國家標(biāo)準(zhǔn)品，如果申報試劑今后有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)品發(fā)布，應(yīng)當(dāng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品對產(chǎn)品進(jìn)行檢驗。可提交以下任一形式的檢驗報告：

3.3.1申請人出具的自檢報告。

3.3.2委托有資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗機(jī)構(gòu)出具的檢驗報告。

如產(chǎn)品提交自檢報告，還需按照《醫(yī)療器械注冊自檢管理規(guī)定》的要求提交相應(yīng)資料。

4.分析性能研究

申請人應(yīng)當(dāng)在原材料和生產(chǎn)工藝經(jīng)過選擇和確認(rèn)、質(zhì)量管理體系得到有效控制并且保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定的基礎(chǔ)上，進(jìn)行產(chǎn)品的分析性能評估。

分析性能評估主要包括樣本穩(wěn)定性、適用的樣本類型、校準(zhǔn)品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值（如適用）、正確度、精密度、空白限、檢出限及定量限、分析特異性、測量區(qū)間及可報告區(qū)間、分析靈敏度、試劑空白等項目的研究資料，應(yīng)當(dāng)采用多批產(chǎn)品進(jìn)行性能評估。建議申請人依據(jù)《定量檢測體外診斷試劑分析性能評估指導(dǎo)原則》以及國內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品分析性能評估的文件開展研究。如申報產(chǎn)品適用不同的機(jī)型，需要提交在不同機(jī)型上進(jìn)行評估的資料。如申報產(chǎn)品包含不同的包裝規(guī)格，需要對各包裝規(guī)格進(jìn)行分析或驗證。

性能評估時應(yīng)將試劑、儀器和所選用的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品作為一個整體進(jìn)行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括試驗時間、地點、檢驗人員、適用儀器、試劑規(guī)格和批號、所選用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品等。

對于本試劑，建議主要對以下分析性能進(jìn)行研究：

4.1樣本穩(wěn)定性

申請人應(yīng)充分考慮實際使用過程中樣本采集、處理、運輸及保存等各個階段的條件，對不同類型樣本的穩(wěn)定性分別進(jìn)行評價并提交研究資料。內(nèi)容包括建議的保存條件、允許的凍融次數(shù)（如適用）、添加劑（如抗凝劑）和運輸條件(如涉及）等。樣本穩(wěn)定性內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說明書【樣本要求】中進(jìn)行詳細(xì)說明。

4.2適用的樣本類型

血清、肝素抗凝血漿是堿性磷酸酶測定的適宜樣本。其他抗凝劑如草酸鹽、檸檬酸鹽、EDTA鈉鹽等，對堿性磷酸酶活性存在干擾，此類血漿不宜用于堿性磷酸酶的檢測。申請人應(yīng)對適用的樣本類型及添加劑進(jìn)行適用性確認(rèn)。如申報產(chǎn)品適用于血清和血漿，可采用一定數(shù)量血清、血漿同源樣本進(jìn)行對比試驗的方法，證明不同樣本類型是否可比。樣本量應(yīng)體現(xiàn)一定的統(tǒng)計學(xué)意義。

4.3校準(zhǔn)品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值（如適用）

申請人應(yīng)明確申報產(chǎn)品適用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。申請人應(yīng)提供試劑配套校準(zhǔn)品量值溯源相關(guān)資料，提供質(zhì)控品賦值及其質(zhì)控范圍確定的相關(guān)資料。

可參照GB/T 21415《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》、YY/T 1709《體外診斷試劑用校準(zhǔn)物測量不確定度評定》、YY/T 1549《生化分析儀用校準(zhǔn)物》的要求，提供校準(zhǔn)品溯源以及校準(zhǔn)品定值及不確定度計算的相關(guān)資料?？蓞⒄誝Y/T 1662《生化分析儀用質(zhì)控物》《質(zhì)控品注冊審查指導(dǎo)原則——質(zhì)控品賦值研究》的要求，提供質(zhì)控品的賦值資料。

如校準(zhǔn)品/質(zhì)控品的基質(zhì)不同于臨床常用樣本類型，還應(yīng)提交基質(zhì)效應(yīng)的相關(guān)研究資料。

4.4正確度

正確度（trueness）指無窮多次重復(fù)測量所得量值的平均值與一個參考量值間的一致程度。正確度由系統(tǒng)測量誤差決定，通常用偏倚表示。對測量正確度的評價方法包括：使用參考物質(zhì)的偏差分析、方法學(xué)比對等方法，申請人可根據(jù)實際情況選擇合理方法進(jìn)行研究。

4.4.1使用參考物質(zhì)的正確度評價

采用至少兩個濃度的參考物質(zhì)，代表試劑測量區(qū)間內(nèi)的不同濃度，其中應(yīng)包括醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上/下限附近的濃度。如參考物質(zhì)只有一個水平，且無合理稀釋方法，亦可在說明原因的基礎(chǔ)上，僅采用一個水平的參考物質(zhì)進(jìn)行正確度評價，結(jié)果應(yīng)在申請人給定范圍內(nèi)。

推薦的參考物質(zhì)包括：具有互換性的有證參考物質(zhì)、公認(rèn)的參考品、標(biāo)準(zhǔn)品，參考測量程序賦值的臨床樣本。

4.4.2方法學(xué)比對

采用申報試劑與合理的比較測量程序同時檢測臨床樣本，通過兩者的比對研究和偏倚估計，進(jìn)行申報試劑的正確度評價。比較測量程序可選擇同類試劑或者參考測量程序。臨床樣本的濃度水平應(yīng)覆蓋申報試劑的測量區(qū)間。在性能建立時，建議對每個樣本重復(fù)檢測，以平均值或中位數(shù)進(jìn)行回歸分析，并評價醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上/下限濃度的偏倚。

在實施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對擬申報試劑和比較測量程序進(jìn)行初步評估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行比對試驗。方法學(xué)比對時應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。

4.5精密度

精密度由隨機(jī)測量誤差決定，通常用標(biāo)準(zhǔn)差、方差或變異系數(shù)表示。精密度一般包括重復(fù)性、中間精密度和再現(xiàn)性。應(yīng)考慮運行、時間、操作者、測量儀器、測量程序、試劑批次、校準(zhǔn)品、地點、環(huán)境條件等影響精密度的條件，設(shè)計合理的精密度試驗方案進(jìn)行評價。樣本濃度一般包括測量區(qū)間高、中、低在內(nèi)的3～5個水平，應(yīng)有醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上/下限濃度附近的樣本

4.6空白限、檢出限及定量限

申請人可根據(jù)產(chǎn)品的具體情況選擇適用的方法進(jìn)行檢出能力的研究，建議對空白限（LoB）、檢出限（LoD）、定量限（LoQ）進(jìn)行評估并提交研究資料?？蓞⒄铡抖繖z測體外診斷試劑分析性能評估注冊審查指導(dǎo)原則》，提供空白限、檢出限與定量限的建立及驗證的研究資料。

4.7分析特異性

應(yīng)評估分析待測樣本中和試劑使用過程中潛在干擾物質(zhì)，并對干擾程度進(jìn)行量化。

常見的干擾物質(zhì)包括但不限于膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯、膽固醇、類風(fēng)濕因子、樣本添加劑（抗凝劑或防腐劑）、抗壞血酸、常用藥物及其代謝物及膳食物質(zhì)等，亦應(yīng)考慮文獻(xiàn)中已報道的對類似試劑或測量程序存在干擾的物質(zhì)。

干擾物濃度的分布應(yīng)覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度，至少采用臨床樣本中的最高濃度（最差情形）進(jìn)行干擾篩查或驗證。樣本量選擇應(yīng)體現(xiàn)一定的統(tǒng)計學(xué)意義。待評價的堿性磷酸酶樣本濃度建議采用至少2個分析物水平的樣本，其濃度應(yīng)在醫(yī)學(xué)決定水平或參考區(qū)間上/下限附近。

4.8線性區(qū)間、測量區(qū)間及可報告區(qū)間

申請人應(yīng)評估申報產(chǎn)品的線性區(qū)間、測量區(qū)間及可報告區(qū)間并提交研究資料。

4.8.1 線性區(qū)間

線性區(qū)間的研究，需采用高值和零濃度/低值濃度的樣本按比例精確配制的一系列不同濃度的樣本。線性區(qū)間建立時，需配制出較預(yù)期線性區(qū)間更寬的至少9個左右不同濃度的樣本（不包括零濃度樣本），每個樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測，根據(jù)可接受線性偏差和各濃度的重復(fù)性，確定檢測次數(shù)。采用重復(fù)檢測均值和預(yù)期值進(jìn)行直線回歸分析，建議采用加權(quán)最小二乘回歸等分析方法，提供散點圖、線性回歸方程、線性相關(guān)系數(shù)（r）及線性偏差，判斷結(jié)果是否滿足可接受標(biāo)準(zhǔn)。

驗證線性區(qū)間時，可將接近線性區(qū)間上限的高值樣本按一定比例稀釋至少為5個不同濃度，每一濃度的樣本至少重復(fù)測定2次，計算其平均值，求出線性方程。

4.8.2測量區(qū)間及可報告區(qū)間

測量區(qū)間，也稱分析測量區(qū)間，在該區(qū)間內(nèi)，臨床樣本在未經(jīng)稀釋、濃縮，或非常規(guī)測量程序中步驟的其他前處理情況下，檢測結(jié)果的線性偏差、不精密度和偏倚均在可接受范圍內(nèi)。測量區(qū)間下限為定量限，線性區(qū)間包含測量區(qū)間。

如對超出線性區(qū)間的濃度樣本可進(jìn)行稀釋后檢測，應(yīng)研究適用的稀釋液和聲稱的稀釋倍數(shù)，從而確定試劑的可報告區(qū)間。

4.9 試劑空白

試劑空白包括試劑空白吸光度和試劑空白吸光度變化率。用生理鹽水或純化水，在特定溫度、波長、光徑條件下，記錄測試啟動時的吸光度（A1）、和一段時間的吸光度（A2），A2測試結(jié)果即為試劑空白吸光度測定值；計算出吸光度變化值（｜A2-A1｜/t）（t為測量時間間隔）即為試劑空白吸光度變化率。

4.10分析靈敏度

試劑盒測試給定濃度的被測物時，吸光度變化率（ΔA）應(yīng)符合申請人給定范圍。

5.參考區(qū)間確定資料

申報產(chǎn)品可以通過建立或驗證的方法確定產(chǎn)品的參考區(qū)間，可參照《體外診斷試劑參考區(qū)間確定注冊審查指導(dǎo)原則》的要求進(jìn)行研究。

采用驗證的方法確定申報試劑參考區(qū)間時，需要滿足以下條件：第一，原始參考區(qū)間的研究應(yīng)系統(tǒng)全面，具有可信性，如已發(fā)布實施的臨床檢測參考區(qū)間標(biāo)準(zhǔn)等;第二，檢測系統(tǒng)需具有可比性；第三，參考區(qū)間研究的分析前因素需具有可比性，如參考個體的狀態(tài)，標(biāo)本采集和處理程序等; 第四，參考人群的適宜性。原始參考區(qū)間研究所采用的參考人群應(yīng)在人群分布的地理位置、人口統(tǒng)計學(xué)特征等方面與申報試劑預(yù)期適用人群相一致，或包含符合參考區(qū)間建立參考樣本數(shù)量要求的上述參考人群。如不能同時滿足上述條件，申請人需建立自己的參考區(qū)間。

堿性磷酸酶測定試劑可依據(jù)WS/T 404.1《臨床常用生化檢驗項目參考區(qū)間 第1部分：血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶和γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶》的相關(guān)要求，采用驗證的方法確定本產(chǎn)品的參考區(qū)間。

無論是建立自己的參考區(qū)間或驗證參考區(qū)間，都要確保參考區(qū)間的可溯源性，記錄確定參考區(qū)間的所有步驟，包括參考個體的選擇、分析前因素、樣本檢測以及統(tǒng)計分析方法等。

6.穩(wěn)定性研究

主要包括實時穩(wěn)定性（貨架有效期）、使用穩(wěn)定性以及運輸穩(wěn)定性等。申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案，同時應(yīng)注意選取代表性包裝規(guī)格進(jìn)行研究。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方案、研究報告和研究數(shù)據(jù)。

6.1實時穩(wěn)定性（貨架有效期）

提交至少三批申報產(chǎn)品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的實時穩(wěn)定性研究資料。明確儲存的環(huán)境條件（如溫度、濕度和光照）及有效期。

6.2使用穩(wěn)定性

堿性磷酸酶測定反應(yīng)在堿性條件下進(jìn)行，開封試劑可能因吸收空氣中的二氧化碳而使pH降低，影響測定結(jié)果，應(yīng)注意開封試劑的使用時間，采用合適的校準(zhǔn)計劃。

提交至少一批申報產(chǎn)品實際使用期間穩(wěn)定性的研究資料，應(yīng)包括所有組成成分的開封穩(wěn)定性。適用時提交復(fù)溶穩(wěn)定性、機(jī)載穩(wěn)定性及凍融次數(shù)研究資料等。如涉及校準(zhǔn)品，還應(yīng)提交校準(zhǔn)頻率或校準(zhǔn)穩(wěn)定性研究資料。明確產(chǎn)品使用的溫度、濕度條件等。

6.3運輸穩(wěn)定性

提交至少一批申報產(chǎn)品在特定或者預(yù)期的條件下運輸?shù)难芯抠Y料，應(yīng)說明產(chǎn)品正確運輸?shù)沫h(huán)境條件（如溫度、濕度、光照和機(jī)械保護(hù)等）。同時說明產(chǎn)品的包裝方式以及暴露的最差運輸條件。

7.其他資料

7.1反應(yīng)體系（如需提供）

應(yīng)包含產(chǎn)品確定反應(yīng)溫度、時間、緩沖體系比較等條件的研究資料、確定樣本和試劑盒組分加樣量的研究資料。

7.2主要原材料研究資料和生產(chǎn)工藝研究資料（如適用）

主要原材料的研究資料包括主要原材料的來源、選擇、制備方法的研究資料，質(zhì)量分析證書，主要原材料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定和檢驗資料。如適用，提交企業(yè)參考品的研究資料，包括來源、組成、陰陽性和/或量值確認(rèn)等。

生產(chǎn)工藝的研究資料包括工作液的配制、分裝和凍干，顯色/發(fā)光等結(jié)果放大系統(tǒng)的確定等。

7.3三批產(chǎn)品的生產(chǎn)及自檢記錄。

提供三批產(chǎn)品生產(chǎn)及自檢記錄的復(fù)印件。如產(chǎn)品包含校準(zhǔn)品和（或）質(zhì)控品，還應(yīng)提供校準(zhǔn)品的定值記錄和質(zhì)控品的賦值記錄

7.4證明產(chǎn)品安全性、有效性的其他非臨床研究資料（如適用）。

（四）臨床評價資料

根據(jù)體外診斷試劑臨床評價的相關(guān)要求，申報產(chǎn)品用于肝膽疾病和骨骼疾病的輔助診斷時屬于列入《免于臨床試驗體外診斷試劑目錄》的項目，申請人應(yīng)按照《免于臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價技術(shù)指導(dǎo)原則》提交臨床評價資料，也可通過臨床試驗的方式進(jìn)行臨床評價。

若產(chǎn)品的預(yù)期用途超出《免于臨床試驗體外診斷試劑目錄》中的描述，應(yīng)按照《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》《醫(yī)療器械臨床試驗質(zhì)量管理規(guī)范》的要求，提交臨床試驗的相關(guān)資料。

（五）產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽樣稿

產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽應(yīng)符合《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》和《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨列明參考文獻(xiàn)的相關(guān)信息。產(chǎn)品說明書內(nèi)容原則上應(yīng)全部用中文進(jìn)行表述，如含有國際通用或行業(yè)內(nèi)普遍認(rèn)可的英文縮寫，可在說明書適合位置解釋標(biāo)注；對于確實無適當(dāng)中文表述的詞語，可使用相應(yīng)英文或其縮寫。

下面對堿性磷酸酶測定試劑盒說明書的重點內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明，以指導(dǎo)注冊申報人員更合理地完成說明書編制。

1.【產(chǎn)品名稱】

試劑（盒）名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：堿性磷酸酶測定試劑盒（NPP底物-AMP緩沖液法）。

2.【包裝規(guī)格】

應(yīng)注明可測試的樣本數(shù)或裝量，如××測試/盒、××人份/盒、××mL，除國際通用計量單位外，其余內(nèi)容均應(yīng)用中文進(jìn)行表述。

3.【預(yù)期用途】

說明試劑盒用于體外定量檢測血清或血漿中堿性磷酸酶的活性。

詳細(xì)說明預(yù)期用途，對堿性磷酸酶進(jìn)行背景介紹，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法；說明與預(yù)期用途相關(guān)的臨床背景情況；說明被測分析物與臨床適應(yīng)證的關(guān)系。

4.【檢驗原理】

應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要成分簡要說明檢驗的原理、方法，必要時可采取圖示方法表示，檢測原理的描述應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要組成成分、被測物和產(chǎn)物的關(guān)系進(jìn)行描述：

如：本產(chǎn)品以磷酸對硝基苯酚（4-NPP）為底物，2-氨基-2-甲基-1-丙醇（AMP）為磷酸酰基受體物質(zhì)，增進(jìn)酶反應(yīng)速率，在堿性磷酸酶（ALP）催化下，4-NPP分裂出磷酸基團(tuán)，生成游離的對硝基苯酚（4-NP），后者在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成醌式結(jié)構(gòu)，呈現(xiàn)較深的黃色。反應(yīng)式如下：

由于反應(yīng)中4-NP的生成速率與ALP活性呈正比，因此在37℃、405nm波長下監(jiān)測吸光度上升速率，可得出ALP的活性。

5.【主要組成成分】

5.1對于產(chǎn)品中包含的試劑組分，說明各組分的名稱、數(shù)量、裝量。說明各組分中的核心反應(yīng)成分、顯色物質(zhì)、緩沖液基質(zhì)、防腐劑。生物活性材料應(yīng)提供其生物學(xué)來源、活性及其他特性。必要時，明確組分在基質(zhì)中的濃度、比例等信息，多組分試劑盒應(yīng)明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換(如適用)。

5.2.需要但未提供的試劑。對于產(chǎn)品中不包含，但對該試驗必需的試劑如單獨注冊的校準(zhǔn)品/質(zhì)控品、樣本保存液等應(yīng)列出各組分的名稱、生產(chǎn)商及其注冊證號或備案號。

5.3.對于校準(zhǔn)品和質(zhì)控品（如適用），應(yīng)說明濃度水平、核心反應(yīng)成分及其生物學(xué)來源，明確緩沖液基質(zhì)、防腐劑等。注明校準(zhǔn)品的定值及其溯源性。注明質(zhì)控品的靶值、靶值范圍和計算方法。若校準(zhǔn)品或質(zhì)控品的值為批特異，可注明批特異，并附單獨的靶值單。

6.【儲存條件及有效期】

6.1明確貨架保存條件及有效期，如2-8℃保存，有效期12個月。同時明確特殊保存條件，如禁止冷凍、光線和濕度要求等。保存溫度不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”“室溫”，應(yīng)直接以℃為單位。

6.2明確各組分的使用穩(wěn)定性，包括開封保存條件和保存時長、凍融次數(shù)、機(jī)載穩(wěn)定性等。

6.3明確生產(chǎn)日期、使用期限/失效日期、有效期至見標(biāo)簽。

6.4不同組分保存條件不一致，應(yīng)分別描述。若各組分的有效期不同，則試劑盒的有效期為最短保存時間。

7.【適用儀器】

說明適用的儀器及其型號，并提供與儀器有關(guān)的信息以便用戶能夠正確選擇使用。

8.【樣本要求】

應(yīng)明確以下內(nèi)容：

8.1明確適用的樣本類型，詳細(xì)描述樣本的采集和保存方法，明確樣本收集過程中的注意事項。說明為保證樣本各組分穩(wěn)定所必需的抗凝劑等，注明對抗凝劑的要求（如草酸鹽、檸檬酸鹽、EDTA鈉鹽對堿性磷酸酶活性造成干擾，應(yīng)明確避免使用的提示）。

8.2樣本穩(wěn)定性：明確能夠保證樣本穩(wěn)定保存的條件。如需凍存，應(yīng)明確凍存條件和凍融次數(shù)的要求。以上內(nèi)容應(yīng)與樣本穩(wěn)定性的研究結(jié)果一致。

8.3若特定樣本不適用或需進(jìn)一步處理后使用，需明確。

9.【檢驗方法】

詳細(xì)說明試驗操作的各個步驟，包括：

9.1試劑配制方法、注意事項；

9.2試驗條件：溫度、時間、測定主/副波長、試劑用量、樣本用量、測定方法、反應(yīng)類型、反應(yīng)方向、反應(yīng)時間等以及試驗過程中的注意事項；

9.3校準(zhǔn)程序：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項、校準(zhǔn)曲線的繪制。

9.4質(zhì)量控制程序：質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等；建議在本部分注明以下字樣：如果質(zhì)控結(jié)果與預(yù)期不符，提示檢測結(jié)果不可靠，不應(yīng)出具檢測報告。

9.5檢驗結(jié)果的計算：應(yīng)明確檢驗結(jié)果的計算方法。

10.【參考區(qū)間】

明確參考區(qū)間，并簡要說明建立或驗證參考區(qū)間的基本信息，包括：樣本量、人群特征（如性別、年齡、種族等）和采用的統(tǒng)計學(xué)方法。

建議注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考范圍”。

11.【檢驗結(jié)果的解釋】

依據(jù)參考區(qū)間對檢測結(jié)果進(jìn)行解釋說明，必要時可采用圖示的方法進(jìn)行說明。說明在何種情況下需要進(jìn)行復(fù)測或確認(rèn)試驗（如需要）。說明可能對試驗結(jié)果產(chǎn)生影響的因素。

12.【檢驗方法的局限性】

說明該檢驗方法的局限性。如該試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，不能單獨作為臨床診治的依據(jù)，應(yīng)結(jié)合患者性別、年齡、病史及其他實驗室指標(biāo)等信息綜合考慮。當(dāng)檢驗結(jié)果出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析查找原因并重新確認(rèn)等。

說明其他可能存在的問題 。

13.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)概括描述每項分析性能研究如準(zhǔn)確度/正確度、精密度、空白限、檢出限、定量限、分析靈敏度、線性區(qū)間、分析特異性等適用項目的研究方法和結(jié)果。概括描述臨床評價包括免于臨床試驗的臨床評價和臨床試驗的方法和結(jié)果。

14.【注意事項】

建議包括以下內(nèi)容：

14.1產(chǎn)品僅用于體外診斷，試劑中含有的化學(xué)成分接觸人體后是否會產(chǎn)生不良的影響后果。

14.2如無確切的證據(jù)證明其安全性，對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待，提示操作者采取必要的防護(hù)措施。若試劑組分中，如質(zhì)控品、校準(zhǔn)品等含有人源物質(zhì)的組分，這些組分亦應(yīng)該被視為傳染源對待；對于動物源性組分，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。

14.3采用不同方法學(xué)的試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學(xué)解釋；建議實驗室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報告注明所用試劑特征。

14.4其他有關(guān)堿性磷酸酶測定的注意事項。

14.【標(biāo)識的解釋】

說明書和標(biāo)簽中如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。

（六）質(zhì)量管理體系文件

主要包括綜述、生產(chǎn)制造信息、質(zhì)量管理體系程序、管理職責(zé)程序、資源管理程序、產(chǎn)品實現(xiàn)程序、質(zhì)量管理體系的測量、分析和改進(jìn)程序、其他質(zhì)量體系程序信息以及質(zhì)量管理體系核查文件等。

三、參考文獻(xiàn)

[1]尚紅,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程（第4版）[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2015.

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[3]國家食品藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定:國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號[Z].

[4]國家藥品監(jiān)督管理局.免于臨床試驗體外診斷試劑目錄：國家藥監(jiān)局通告2021年第70號[Z].

[5]國家藥品監(jiān)督管理局.免于臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價技術(shù)指導(dǎo)原則:國家藥監(jiān)局通告2021年第74號[Z].

[6]國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械審評中心.定量檢測體外診斷試劑分析性能評估注冊審查指導(dǎo)原則:國家藥監(jiān)局器審中心通告2022年第32號[Z].

[7]國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械審評中心.體外診斷試劑參考區(qū)間確定注冊審查指導(dǎo)原則:國家藥監(jiān)局器審中心關(guān)于發(fā)布定性檢測體外診斷試劑分析性能評估等6項醫(yī)療器械產(chǎn)品注冊審查指導(dǎo)原則通告2022年第36號[Z].

[8]國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械審評中心.體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則：國家藥監(jiān)局器審中心關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑主要原材料研究注冊審查指導(dǎo)原則等12項注冊審查指導(dǎo)原則通告2024年第1號[Z].

[9]國家藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則:國家藥監(jiān)局通告2022年第8號[Z].

[10]GB/T 42062-2022,醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用[S].

[11]GB/T 21415-2008,體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性[S].

[12]YY/T 1234-2014,堿性磷酸酶測定試劑（盒）（NPP底物-AMP緩沖液法）[S].

[13]YY/T 1549-2017,生化分析儀用校準(zhǔn)物[S].

[14]YY/T 1662-2019,生化分析儀用質(zhì)控物[S].

[15]YY/T 1709-2020,體外診斷試劑用校準(zhǔn)物測量不確定度評定[S].

[16]WS/T 404.1-2018,臨床常用生化檢驗項目參考區(qū)間 第1部分：血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶和γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶[S].