附件：尿素測定試劑注冊技術審查指導原則（2019年第74號）.doc

尿素測定試劑注冊技術審查指導原則

本指導原則旨在指導注冊申請人對尿素測定試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導原則是對尿素測定試劑的一般要求，申請人應依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。

本指導原則是供申請人和審查人員使用的指導文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關法規(guī)的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)、標準體系的不斷完善和科學技術的不斷發(fā)展，本指導原則相關內(nèi)容也將適時進行調整。

一、適用范圍

尿素測定試劑是指基于分光光度法原理，利用全自動、半自動生化分析儀或分光光度計，對人血清、血漿中尿素濃度進行體外定量分析的試劑。

依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）、《食品藥品監(jiān)管總局關于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），尿素測定試劑管理類別為Ⅱ類，分類編碼6840。

從方法學上講，本指導原則只適用于酶偶聯(lián)監(jiān)測法測定尿素?；谄渌椒▽W的尿素測定試劑盒可參照本指導原則，但應根據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中的內(nèi)容是否合適，若不適用，應另外選擇適用自身方法學特性的研究步驟及方法。

酶偶聯(lián)監(jiān)測法測定原理：

尿素在尿素酶作用下水解為NH4＋和CO2，NH4＋、NADH和α-酮戊二酸在谷氨酸脫氫酶作用下生成CO2。谷氨酸和NAD+。由于NADH被氧化成NAD+，在340nm吸光度降低，其吸光度降低值與尿素濃度成正比。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

尿素是人體蛋白質和氨基酸代謝的終末產(chǎn)物，體內(nèi)氨基酸經(jīng)脫氨基作用分解成a-酮酸和NH3。NH3 在肝細胞內(nèi)進入尿素循環(huán)，與CO2反應生成尿素。尿素的生成量取決于飲食蛋白的攝入量、組織蛋白質的分解代謝和肝功能狀況。生成的尿素經(jīng)血液循環(huán)主要由腎臟排出。尿素的分子量?。?0D），血漿中的尿素可全部從腎小球濾過，正常情況下約30%～40%被腎小管重新吸收，腎小管亦可少量排泌尿素。人體內(nèi)的氮主要以尿素的形式排泄，尿素在肝內(nèi)合成，釋放到血液中，然后通過腎臟排出，在腎小球腎炎、休克、尿路梗阻、腎盂腎炎和其他原因引起的急、慢性腎功能衰竭時，會導致血清尿素氮濃度升高。嚴重充血性心力衰竭、營養(yǎng)過度、糖尿病酮癥酸中毒、脫水和胃腸道出血，都會使尿素升高。而低尿素常見于懷孕時蛋白質攝入減少、急性肝功能衰竭和靜脈輸液治療中。

綜述資料主要包括產(chǎn)品預期用途、產(chǎn)品描述、方法學特征、生物安全性評價、研究結果總結以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，應符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關要求。相關描述應至少包含如下內(nèi)容：

1.產(chǎn)品預期用途及預期用途相關的臨床適應癥背景情況

1.1尿素的生物學特征、結構與功能，在體內(nèi)正常和病理狀態(tài)下的代謝途徑和存在形式。

1.2與預期用途相關的臨床適應癥背景情況，如臨床相關疾病的發(fā)生、實驗室診斷方法等。

2.產(chǎn)品描述

包括產(chǎn)品所采用的技術原理，主要原材料的來源、質量控制及制備方法，主要生產(chǎn)工藝過程及關鍵控制點，校準品的制備方法及量值溯源情況，質控品的制備方法及定值情況。

3.有關生物安全性方面的說明

體外診斷試劑中的主要原材料，如果采用動物、病原體、人源的組織或體液等生物材料經(jīng)處理或添加某些物質制備而成，應當提供相應的說明文件，證明其在運輸、使用過程中對使用者和環(huán)境是安全的，并對上述原材料所采用的滅活等試驗方法進行說明。人源性材料需對有關傳染病（HIV、HBV、HCV等）病原體檢測予以說明，并提供相關的證明文件。

4.有關產(chǎn)品主要研究結果的總結和評價。

5.其他

包括同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準上市的情況。相關產(chǎn)品所采用的技術方法及臨床應用情況，申請注冊產(chǎn)品與國內(nèi)外同類產(chǎn)品的異同等。

（二）主要原材料研究資料（如需提供）

應提供主要原材料、校準品（如產(chǎn)品包含）、質控品（如產(chǎn)品包含）的選擇、制備、質量標準及驗證有關的研究資料，質控品的定值試驗資料，校準品的溯源性文件等。

（三）主要生產(chǎn)工藝和反應體系的研究資料（如需提供）

主要工藝包括：工作液的配制、分裝或凍干等描述及確定依據(jù)，應包含產(chǎn)品的工藝流程圖和關鍵控制點；反應體系包括樣本采集及處理、樣本要求、樣本用量、試劑用量、反應條件（溫度、時間等）、校準方法、質控方法等研究資料。

（四）分析性能評估資料

1.引言

1.1概述：簡單描述試劑的反應方法、試劑研制或優(yōu)化的過程，性能評估的目的；

1.2列舉性能評估所引用的相關標準和資料；

1.3性能評估使用試劑的組成、包裝規(guī)格、批號、有效期、注冊證信息（如有）；

1.4校準品、質控品的生產(chǎn)企業(yè)名稱、批號、有效期、注冊證信息；

1.5使用的儀器名稱、型號；測定原理及該儀器的反應參數(shù)。

2.應至少提供三個批次樣品的分析性能評估資料，包括具體的研究方法、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法、研究結論等。性能評估時應將試劑和所選用的校準品、質控品作為一個整體進行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。

性能評估應至少包括準確度、精密度、線性范圍、分析特異性（抗干擾能力）、分析靈敏度、試劑空白吸光度、試劑空白吸光度變化率及其他影響檢測的因素等。

2.1準確度

對測量準確度的評價包括：相對偏差、比對試驗或回收試驗等方法，企業(yè)可根據(jù)實際情況選擇合理方法進行研究。

2.1.1相對偏差

該研究項目用有證參考物質（CRM）和相應的參考測量程序對試劑（盒）進行測試，重點觀察對相應（參考物質）檢測結果的偏差情況。

2.1.2比對試驗

建議參考《體外診斷試劑分析性能評估（準確度-方法學比對）技術審查指導原則》等相關國內(nèi)外性能評估指導原則。

使用普遍認為質量較好的已上市同類試劑作為參比試劑，與擬申報試劑同時檢測一批人待測樣品（至少40例樣本），每份樣品按待測試劑（盒）操作方法及比對方法分別檢測，用線性回歸方法計算兩組結果的相關系數(shù)（r)及每個濃度點的相對偏差。

在實施方法學比對前，應分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認兩者都分別符合各自相關的質量標準后方可進行比對試驗。方法學比對時應注意質量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結果進行合理的統(tǒng)計學分析。其中，濃度分布應覆蓋產(chǎn)品的可報告范圍。

2.1.3回收試驗

建議參考《體外診斷試劑分析性能評估（準確度-回收實驗）技術審查指導原則》要求完成準確度評估。以人血清樣品為例：

在人血清樣品中加入一定體積標準品或校準品溶液或純品，分別測定回收樣本及基礎血清樣本濃度，計算回收率。

選擇合適濃度的人血清樣本，分為體積相同的3～4份，在其中2～3份樣本中加入不同濃度相同體積的標準品或校準品溶液或純品制備待回收分析樣本，加入體積小于原體積的10%，制成2～3個不同濃度的待回收分析樣本，計算加入的待測物的濃度。在另一份樣本中加入同樣體積的無待測物的溶劑，制成基礎樣本。用待評價系統(tǒng)對待回收分析樣本和基礎樣本進行測定，對樣本分別重復測定3次，計算回收率。

數(shù)據(jù)處理及結果報告：

2.1.3.1加入濃度n=標準液濃度n×[標準液加入體積/(樣本體積+標準液體積)]

2.1.3.2計算回收率：

2.1.3.3計算平均回收率：

2.1.3.4計算每個樣本回收率與平均回收率的差值：

每個樣本回收率與平均回收率的差值＝回收率n－平均回收率

如差值超過±10%，應查找原因并糾正，重新進行評估。

2.1.3.5計算比例系統(tǒng)誤差：

比例系統(tǒng)誤差 = |100% - 平均回收率|

2.1.3.6結果評估：

回收率結果至少應滿足在90％～110％范圍內(nèi)，同時滿足臨床需求。

2.2精密度

測量精密度的評估應至少包括高、低值質控品或兩個濃度水平的樣本進行，兩個濃度都應在試劑盒的測量范圍內(nèi)且有一定的臨床意義（醫(yī)學決定水平）。通常選用該檢測指標的臨界值附近樣本和異常高值樣本。測量精密度的評價方法并無統(tǒng)一的標準可依，可根據(jù)不同的試劑特征或申請人的研究習慣進行，建議參考CLSI EP05-A3或國內(nèi)有關體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件。

2.3線性范圍

建立試劑線性范圍所用的樣本基質應盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預期測定上限的混合人血清，且應充分考慮多倍稀釋對樣本基質的影響。需在預期測定范圍內(nèi)選擇7～11個濃度水平，如將預期測定范圍加寬至130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實驗結果逐漸減少數(shù)據(jù)點直至表現(xiàn)出線性關系，確定出線性范圍。超出線性范圍的樣本如需稀釋后測定，應作相關研究，明確稀釋液類型及最大可稀釋倍數(shù)，研究過程應注意基質效應影響，必要時應提供基質效應研究有關的資料。

2.4分析特異性

應明確已知干擾因素對測定結果的影響：可采用回收實驗對不同濃度的溶血、黃疸、脂血對檢測結果的影響進行評價，干擾物濃度的分布應覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質濃度，明確干擾物質無影響的最大濃度。藥物干擾的研究可根據(jù)需要由申請人選擇是否進行或選擇何種藥物及其濃度進行。

2.5分析靈敏度

用已知濃度的樣品進行測試，記錄在試劑（盒）規(guī)定參數(shù)下產(chǎn)生的吸光度改變。換算為n單位吸光度差值（ΔA）或吸光度變化率（ΔA/min）即為本產(chǎn)品的分析靈敏度。

2.6試劑空白吸光度

用指定空白樣品測試尿素試劑（盒）。在測定分析儀設定參數(shù)下，記錄測試反應完成后的吸光度（A），重復檢測，測試結果即為試劑空白吸光度測定值。

2.7試劑空白吸光度變化率

用指定空白樣品測試試劑（盒），在測試主波長下，記錄測試啟動時的吸光度（A1)，扣除反應的非線性段或約5min(t)后的吸光度（A2),計算出吸光度變化值|A2-A1|/t即為試劑空白吸光度變化率（ΔA/min）。

2.8抗凝劑的影響

如果試劑盒適用樣本類型包括血漿樣本，應采用各種適用抗凝劑抗凝的血漿樣本分別與血清樣本進行試驗研究。方法為對比線性范圍內(nèi)的同一病人的血清和血漿樣本（不同抗凝劑樣本例數(shù)要有統(tǒng)計學意義），應包含醫(yī)學決定水平以及低值濃度樣本進行檢測以驗證申報試劑對于血清和血漿樣本檢測結果的一致性。

2.9其他需注意問題

2.9.1如注冊申請包括不同適用機型，需要提交在不同機型上進行上述項目評估的試驗資料及總結。

如注冊申請中包含不同的包裝規(guī)格，需要對不同包裝規(guī)格之間的差異進行分析或驗證。如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品進行的上述項目評估的試驗資料及總結。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。

2.9.2校準品溯源及質控品定值（如有）

校準品應提供詳細的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源性文件等，質控品應當提交在所有適用機型上進行的定值資料。應參照GB/T 21415-2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質賦值的計量學溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準品及試劑盒配套校準品定值及不確定度的研究資料，提供質控品定值及其靶值范圍確定的研究資料。

（五）參考區(qū)間確定資料

提供參考區(qū)間確定所采用的樣本來源、確定方法及詳細的試驗資料,應明確參考人群的參考標準，研究各組（如性別、年齡等）例數(shù)應符合統(tǒng)計學要求。若引用針對中國人群的參考區(qū)間研究的相關文獻，建議參考WS/T404.5-2015《臨床常用生化檢驗項目參考區(qū)間第5部分：血清尿素、肌酐》進行驗證。

研究結論應與產(chǎn)品說明書【參考區(qū)間】的相應描述保持一致。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。

試劑的穩(wěn)定性，通常包括實時穩(wěn)定性（有效期）、開瓶穩(wěn)定性、復溶穩(wěn)定性等。穩(wěn)定性研究資料應包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結論。實時穩(wěn)定性研究，應提供至少3批樣品在實際儲存條件下至成品有效期后的研究資料。

樣本穩(wěn)定性主要包括室溫保存、冷藏或冷凍條件下的有效期驗證，適用冷凍保存的樣本，應對凍融次數(shù)進行評價。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結果均應在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。

（七）臨床評價資料

此項目已經(jīng)列入《關于新修訂免于進行臨床試驗醫(yī)療器械目錄的通告》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2018年第94號）中免于進行臨床試驗的體外診斷試劑目錄。根據(jù)體外診斷試劑臨床評價的相關要求，申請人可按照《免于進行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第179號）要求進行臨床評價。如無法按要求進行臨床評價，應進行臨床試驗，臨床試驗的開展、方案的制定以及報告的撰寫等均應符合相關法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》的要求。

1.臨床評價路徑

1.申請人應當根據(jù)尿素的具體情況建立適應的評價方法，充分考慮尿素的預期用途，開展具有針對性的評價研究，可以選擇以下兩種評價途徑之一。

1.1與境內(nèi)已上市同類產(chǎn)品進行比較研究試驗，證明兩者具有等效性。應選擇目前臨床普遍認為質量較好的產(chǎn)品作為對比試劑，同時應充分了解對比試劑的技術信息，包括方法學、臨床預期用途、主要性能指標、校準品的溯源情況、推薦的陽性判斷值或參考區(qū)間等，應提供已上市產(chǎn)品的境內(nèi)注冊信息及說明書。

1.2與參考方法進行比較研究試驗，考察待評價試劑與參考方法的符合率/一致性。應選擇參考實驗室進行研究，參考實驗室應具有中國合格評定國家認可委員會（CNAS）認可的相關檢測資質。

2.試驗方法

試驗方法的建立可參考相關方法學比對的指導原則，并重點關注以下內(nèi)容：

2.1樣本要求

2.1.1選擇涵蓋預期用途和干擾因素的樣本進行評價研究，充分考慮試驗人群選擇、疾病選擇等內(nèi)容，樣本應能夠充分評價產(chǎn)品臨床使用的安全性、有效性。

2.1.2樣本數(shù)量應采用合理統(tǒng)計學方法進行計算，應符合統(tǒng)計學要求。該產(chǎn)品可選擇總樣本量不少于40例并分別采用待評價試劑和對比試劑/參考方法進行雙份測定的方式，其中參考區(qū)間以外樣本應不少于50%，亦可選擇總樣本量不少于100例并分別采用待評價試劑和對比試劑/參考方法進行單次測定的方式。

2.1.3應注重醫(yī)學決定水平量值附近樣本的選擇，并涵蓋檢測范圍。如涉及需分層統(tǒng)計等復雜情況,應結合實際情況選擇適當?shù)臉颖玖窟M行充分的臨床評價。

2.1.4評價用的樣本類型應與注冊申請保持一致。對于具有可比性的不同樣本類型，如血清和血漿樣本，可在分析性能評估中對樣本適用性進行研究，或在臨床評價中對每種樣本類型分別進行符合統(tǒng)計學意義數(shù)量的評估。

2.2試驗要點

2.2.1在試驗操作的過程中應采用盲法。待評價試劑和對比試劑/參考方法應平行操作，整個試驗應有內(nèi)部質量控制。

2.2.2建議該產(chǎn)品試驗檢測周期至少5天，以客觀反映實際情況。

2.2.3擴大樣本量和延長實驗時間將提高試驗的可靠性，申請人應選擇適當?shù)臉颖玖窟M行充分的臨床評價。

2.3數(shù)據(jù)收集和處理

對于該產(chǎn)品，應首先進行離群值觀察，離群值的個數(shù)不得超過限值。若未超限，可刪除離群值后進行分析；若超出限值，則需合理分析原因并考慮糾正措施，必要時重新收集樣本進行分析。離群值分析和處理方法應有依據(jù)。

申請人應根據(jù)產(chǎn)品特點選擇合適的統(tǒng)計學方法，統(tǒng)計結果應能證實待評價試劑相對于對比試劑/參考方法檢測結果無明顯偏倚或偏倚量在允許誤差范圍內(nèi)。

3.臨床評價報告

臨床評價報告應對試驗設計、試驗實施情況和數(shù)據(jù)分析方法等進行清晰的描述。應至少包括如下內(nèi)容：

3.1基本信息，如產(chǎn)品名稱、申請人名稱及聯(lián)系方式、試驗時間及地點等。

3.2試驗設計，詳細說明對比試劑/方法選擇、樣本入組和排除標準、樣本量要求、設盲要求、統(tǒng)計分析方法的選擇等內(nèi)容。

3.3試驗實施情況，具體包括：

3.3.1樣本選擇情況，包括例數(shù)、樣本分布等。樣本例數(shù)應詳細說明計算方法及依據(jù)。

3.3.2臨床評價所用產(chǎn)品信息，如評價用試劑、對比試劑/方法、配合使用的其他試劑/儀器的產(chǎn)品名稱、生產(chǎn)企業(yè)、規(guī)格/型號、批號等。

3.3.3實驗過程描述。

3.3.4試驗管理，包括參加人員、質量控制情況、數(shù)據(jù)管理、出現(xiàn)的問題及處理措施等。

3.3.5數(shù)據(jù)分析及評價結果總結，根據(jù)確定的統(tǒng)計方法對檢測數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，對產(chǎn)品的臨床性能進行合理評價。

3.3.6評價數(shù)據(jù)表

應以附件形式對入組的樣本情況進行匯總描述，應至少包括以下內(nèi)容：可溯源樣本編號、樣本基本信息、樣本類型、評價用試劑和對比試劑/方法檢測結果、樣本臨床背景信息或臨床診斷信息（如適用）等。

3.3.7評價報告應由申請人/代理人簽章。

4.其他評價資料

除以上臨床評價報告外,對擬申報產(chǎn)品臨床性能進行評價的相關文獻,可作為補充臨床評價資料提交。文獻的檢索、篩選和分析請參照《醫(yī)療器械臨床評價技術指導原則》的文獻檢索要求。

同時，提醒申請人/代理人注意，以下情形不適用臨床評價，應根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗指導原則》的要求進行臨床試驗：

4.1產(chǎn)品由于方法學更新、產(chǎn)品設計更新等原因造成無法達到反應原理明確、設計定型、生產(chǎn)工藝成熟的。

4.2產(chǎn)品改變常規(guī)預期用途的。

4.3該產(chǎn)品用于消費者自測用。

如需選擇臨床試驗途徑，則臨床試驗的開展、方案的制定以及報告的撰寫等均應符合相關法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》的要求。

5.臨床試驗中的基本要求：

5.1研究方法

選擇境內(nèi)已批準上市的性能不低于試驗用體外診斷試劑的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱待評試劑）與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。

5.2臨床試驗機構的選擇

應選擇至少兩家具備臨床試驗條件的試驗機構，實驗操作人員應有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，待評試劑和參比試劑都應處于有效的質量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復性。

5.3臨床試驗方案

注冊申請人提出臨床試驗申請前應先將臨床試驗方案提交臨床試驗機構倫理委員會審查批準。研究人員應從流行病學、統(tǒng)計學、臨床醫(yī)學、檢驗醫(yī)學等多方面考慮，設計科學合理的臨床研究方案。各臨床研究機構的方案設置應保持一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應在臨床研究機構的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術人員操作完成，申報單位的技術人員除進行必要的技術指導外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗方案中應確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結果時應采用盲法以保證試驗結果的客觀性。各研究單位選用的參比試劑及所用機型應保持一致，以便進行合理的統(tǒng)計學分析。另外，待評試劑的樣本類型應與產(chǎn)品說明書一致，且不應超越參比試劑對樣本類型的檢測要求，如果選擇了參比試劑適用樣本類型以外的樣本，則應采用其他合理方法對額外的樣本類型進行驗證。

5.4研究對象選擇

臨床試驗應選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。企業(yè)在建立病例納入標準時，應考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。在進行結果統(tǒng)計分析時，建議對各類人群分別進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析?？傮w樣本數(shù)不少于200例，異常值樣本數(shù)不少于30%。

血漿應明確抗凝劑的要求、存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本。實驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。

樣本中待測物濃度應覆蓋待評試劑線性范圍，且盡可能均勻分布。

申報的樣本類型均應在臨床試驗中進行驗證。如果聲稱同時適用于血清和血漿樣本，可完成一個樣本類型（血清或血漿）不少于200例的臨床研究，同時可選至少100例另一樣本類型（血漿或血清）同源樣本進行比對研究（采用考核試劑評價），其中不同濃度樣本分布情況與總例數(shù)中分布情況應一致。

如產(chǎn)品發(fā)生涉及檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項，臨床樣本總數(shù)至少為100例（異常值樣本數(shù)不少于30%），并在至少兩家臨床試驗機構開展臨床試驗；變更參考區(qū)間及增加臨床適應癥等變更事項，應根據(jù)產(chǎn)品具體變更情況，酌情增加臨床試驗總樣本數(shù)。

5.5統(tǒng)計學分析

對臨床試驗結果的統(tǒng)計應選擇合適的統(tǒng)計方法。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對待評試劑和參比試劑兩組檢測結果的相關及線性回歸分析，應重點觀察相關系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標。結合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計學負責人選擇合理的統(tǒng)計學方法進行分析，統(tǒng)計分析應可以證明兩種方法的檢測結果無明顯統(tǒng)計學差異。在臨床研究方案中應明確統(tǒng)計檢驗假設，即評價待評試劑與參比試劑是否等效的標準。

5.6結果差異樣本的驗證

對于比較研究試驗中測定結果不符的樣本，應采用已上市的第三方試劑或其他合理的方法進行復核，以便對臨床試驗結果進行分析。如無需復核，應詳細說明理由。

5.7臨床試驗總結報告撰寫

根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》的要求，臨床試驗報告應該對試驗的整體設計及各個關鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結果分析、結論等進行條理分明的描述，并應包括必要的基礎數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。申請人或臨床試驗牽頭單位應對各臨床試驗機構的報告進行匯總，并完成臨床試驗總結報告。臨床試驗報告的格式及內(nèi)容如下：

5.7.1首篇

首篇是每份臨床試驗報告的第一部分，所有臨床試驗報告均應包含該部分內(nèi)容。

5.7.1.1封面標題

包括試驗用體外診斷試劑的通用名稱、試驗開始日期、試驗完成日期、主要研究者（簽名）、臨床試驗機構（蓋章）、統(tǒng)計學負責人簽名及單位蓋章、申請人（蓋章）、申請人的聯(lián)系人及聯(lián)系方式、報告日期、原始資料保存地點。

5.7.1.2目錄

列出整個臨床試驗報告的內(nèi)容目錄和對應頁碼。

5.7.1.3研究摘要

對臨床試驗情況進行簡單的介紹。

5.7.1.4試驗研究人員

列出臨床試驗主要研究人員的姓名、單位、在研究中的職責及其簡歷（列于附件中），主要研究人員包括主要研究者及各單位的主要參加人員、統(tǒng)計學負責人、臨床試驗報告的撰寫人。

5.7.1.5縮略語

臨床試驗報告中所用的縮略語的全稱。

5.7.2正文內(nèi)容和報告格式

5.7.2.1基本內(nèi)容

引言：介紹與臨床試驗產(chǎn)品有關的背景情況，包括：

5.7.2.1.1被測物的來源、生物及理化性質；

5.7.2.1.2臨床預期使用目的，所針對的目標適應癥人群，目前針對該適應癥所采用的臨床或實驗室診斷方法等；

5.7.2.1.3所采用的方法、原理、技術要求等；

5.7.2.1.4國內(nèi)外已批準上市產(chǎn)品的應用現(xiàn)狀等。說明申請人和臨床試驗機構間的合作關系。

5.7.2.2研究目的

說明本臨床試驗所要達到的目的。

5.7.2.3試驗管理

對試驗管理結構的描述：管理結構包括主要研究者、主要參加人員、實驗室質量控制情況、統(tǒng)計/數(shù)據(jù)管理情況以及試驗中發(fā)生的問題及其處理措施等。

5.7.2.4試驗設計

5.7.2.4.1試驗總體設計及方案的描述

試驗的總體設計和方案的描述應清晰、簡潔，必要時采用圖表等直觀的方式。試驗進行時方案修改的情況和任何方案以外的信息來源也應詳細敘述。應包括：

5.7.2.4.1.1臨床試驗的整體管理情況、臨床試驗機構選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹；

5.7.2.4.1.2病例納入/排除標準、不同年齡段人群的預期選擇例數(shù)及標準；

5.7.2.4.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等；

5.7.2.4.1.4統(tǒng)計學方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結果的標準。

5.7.2.4.2試驗設計及試驗方法選擇

試驗設計中應包括以下內(nèi)容：

5.7.2.4.2.1樣本量及樣本量確定的依據(jù)；

5.7.2.4.2.2樣本選擇依據(jù)、入選標準、排除標準和剔除標準；

5.7.2.4.2.3樣本采集、保存、運輸方法等；

5.7.2.4.2.4對比試劑的確立；

5.7.2.4.2.5臨床試驗用所有產(chǎn)品的名稱、規(guī)格、來源、批號、效期及保存條件，對比試劑的注冊情況。待評試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息；

5.7.2.4.2.6質量控制方法：對質量控制方法進行簡要的闡述。試驗人員培訓、儀器日常維護、儀器校準、質控品運行情況，對檢測精密度、質控品回收（或測量值）、抽查結果評估；

5.7.2.4.2.7臨床試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析方法：對各研究單位的病例數(shù)、病種分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。

5.7.2.4.2.7.1數(shù)據(jù)預處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或第三方驗證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計、對異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

5.7.2.4.2.7.2定量值相關性和一致性分析

用回歸分析驗證兩種試劑結果的相關性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結果，x是參比試劑結果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數(shù)，同時應給出b的95%（或99%）置信區(qū)間，定量值結果應無明顯統(tǒng)計學差異。

5.7.2.4.2.8具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結果不一致樣本的校驗等。

5.7.2.4.2.9試驗過程中方案的修改

一般情況下，臨床試驗方案不宜更改。試驗過程中對方案的任何修改均應說明，對更改的時間、理由、更改過程及備案進行詳細闡述并論證其對整個研究結果評價的影響。

5.7.2.5臨床試驗結果及分析

5.7.2.6討論和結論。對總體結果進行總結性描述并簡要分析試驗結果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結論。

5.7.3有關臨床試驗中特別情況的說明

5.7.4附件

5.7.4.1臨床試驗中所采用的其他試驗方法或其他診斷試劑產(chǎn)品的基本信息，如試驗方法、診斷試劑產(chǎn)品來源、產(chǎn)品說明書及注冊批準情況。

5.7.4.2臨床試驗中的所有試驗數(shù)據(jù)，需由臨床試驗操作者、復核者簽字，臨床試驗機構蓋章（封面蓋章和騎縫章）。

5.7.4.3主要參考文獻

5.7.4.4主要研究者簡歷

5.7.4.5申請人需要說明的其他情況等

（八）產(chǎn)品風險分析研究資料

申請人應考慮產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié)，從預期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關的特征、已知及可預見的危害等方面的判定以及對患者風險的估計進行風險分析，應符合YY/T 0316—2016《醫(yī)療器械風險管理對醫(yī)療器械的應用》的要求。風險分析應包含但不僅限于以下方面的內(nèi)容：預期用途錯誤包括：設計開始時未設定預期分析物、未作適用機型驗證、未針對特定的樣本類型驗證。性能特征失效包括：精密度失效、準確度失效、非特異性、穩(wěn)定性失效、測量范圍失效、定性/定量失效、量值溯源失效、校準失效。不正確的結果包括：配方錯誤、采購的原料未能達到設計要求的性能、原材料儲存條件不正確、使用了過期的原材料、反應體系不正確、試劑與包裝材料不相容?？赡艿氖褂缅e誤包括：生產(chǎn)者未按照生產(chǎn)流程操作，檢驗者未按照原料、半成品、成品檢驗標準操作，裝配過程組分、標簽、說明書等漏裝或誤裝，成品儲存或運輸不當，客戶未參照產(chǎn)品說明書設置參數(shù)或使用。與安全性有關的特征包括：有毒化學試劑的化學污染、樣本的潛在生物污染、不可回收包裝或塑料的環(huán)境污染。

（九）產(chǎn)品技術要求

產(chǎn)品技術要求應符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）、《體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）和《關于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術要求編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關規(guī)定。

該產(chǎn)品技術要求中涉及的產(chǎn)品適用的引用文件和主要性能指標等相關內(nèi)容：

1.產(chǎn)品適用的相關文件

1.1 GB/T 21415—2008 體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量 校準品和控制物質賦值的計量學溯源性

1.2 GB/T 191—2008 包裝儲運圖示標志

1.3 GB/T 26124—2011 臨床化學體外診斷試劑（盒）

1.4 YY/T 0316—2016醫(yī)療器械 風險管理對醫(yī)療器械的應用

1.5 YY/T 0638—2008 體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質物中酶催化濃度賦值的計量學溯源性

1.6 YY/T 0466.1—2016 醫(yī)療器械 用于醫(yī)療器械標簽、標記和提供信息的符號 第1部分：通用要求

1.7 YY/T 1201—2013 尿素測定試劑盒(酶偶聯(lián)監(jiān)測法)

2.主要性能指標

2.1外觀

符合生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定的正常外觀要求。

2.2裝量

液體試劑的凈含量應不少于標示量。

2.3試劑空白

2.3.1試劑空白吸光度

在37℃、340nm、1cm光徑條件下試劑空白吸光度應不小于1.0。

2.3.2試劑空白吸光度變化率

在37℃、340nm、1cm光徑條件下，用空白樣品加入試劑測試時，試劑空白吸光度變化率(ΔA/min)應不大于0.04。

用空白樣品測試試劑（盒），在37℃、340nm、1cm光徑條件下，記錄測試啟動時的吸光度（A1），扣除反應的非線性段或約5min(t)后的吸光度（A2），A2測試結果即為試劑空白吸光度測試值，計算出吸光度變化值（｜A2-A1｜/t）(t為測量時間間隔)即為試劑空白吸光度變化率(ΔA/min)。

2.4分析靈敏度

用已知濃度的樣本測試試劑（盒），記錄試劑（盒）在37℃、340nm、1cm光徑條件下的吸光度變化。按照生產(chǎn)企業(yè)規(guī)定的分析靈敏度計算公式計算分析靈敏度，應符合生產(chǎn)企業(yè)聲稱的要求。

2.5線性范圍

試劑線性在0.9mmol/L～35.7mmol/L(37℃)范圍內(nèi)，線性相關系數(shù)（r）應不小于0.9900；

用接近線性范圍上限的高濃度（活性）樣品和接近線性范圍下限的低濃度（活性）樣品或蒸餾水混合成至少5個稀釋濃度分別測試試劑（盒），每個稀釋濃度測試3次，分別求出測定結果的均值（yi）。以稀釋濃度（xi）為自變量，以測定結果均值（yi）為因變量求出線性回歸方程。按公式（1）計算線性回歸的相關系數(shù)（r）。

稀釋濃度（xi）代入線性回歸方程，計算yi的估計值及yi與估計值的相對偏差或絕對偏差。

2.6 精密度

2.6.1 批內(nèi)精密度

在重復性條件下，用高、低值質控品測試同一批號試劑（盒），重復測試至少10次（(n≥10)，分別計算測量值的平均值(）和標準差（SD)。按下列公式計算變異系數(shù)（CV) 。計算變異系數(shù)（CV）應不大于5.0%。

2.6.2 批內(nèi)瓶間差（適用于干粉或凍干試劑）

用高、低值質控品分別測試同一批號的20個待檢試劑（盒），并計算20個測量值的平均值（1）和標準差（SD1）。

用高、低質控品對該批號的1個待檢試劑（盒）重復測試20次，計算結果的均值（2）和標準差（SD2）。按公式（2）、公式（3）計算瓶間差的變異系數(shù)（CV），批內(nèi)瓶間差均應不大于5.0%。

當s1＜s2時，令CV=0

2.6.3 批間差

用同一個質控樣品分別測試3個不同批號的試劑（盒），每個批號測試3次，分別計算每批3次測定的均值(i=1,2,3)，按公式（4）、（5）計算相對極差（R）。

試劑（盒）批間相對極差應不大于10.0%。

2.7準確度

注冊檢驗時應使用國家標準品。

用國家標準品或企業(yè)標化的標準品對試劑（盒）進行測試，重復檢測3次，取測試結果均值（M）按公式（6）計算相對偏差（B）。相對偏差應不超過±15.0%。

式中：

B–相對偏差；

M–測試結果均值；

T–國家標準品或企業(yè)標化的標準品標示值。

2.8穩(wěn)定性

實時穩(wěn)定性：生產(chǎn)企業(yè)應規(guī)定產(chǎn)品的有效期。取到有效期后的樣品檢測，外觀、試劑空白、線性范圍、準確度、分析靈敏度、批內(nèi)精密度應符合技術要求。

干粉試劑、凍干試劑應同時進行復溶穩(wěn)定性試驗，復溶后放置到產(chǎn)品有效期末，產(chǎn)品性能應至少符合線性區(qū)間范圍、準確度的技術要求。

2.9校準品和質控品的性能指標（如產(chǎn)品中包含）

應至少包含外觀、裝量（干粉試劑、凍干品可不做）、準確度、均一性、穩(wěn)定性。凍干型校準品和質控品還應檢測批內(nèi)瓶間差和復溶穩(wěn)定性。

（十）產(chǎn)品注冊檢驗報告

首次申請注冊的尿素測定試劑盒，應該在具有相應醫(yī)療器械檢驗資質和承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機構進行注冊檢驗。出具注冊檢驗報告和產(chǎn)品技術要求預評價意見。

（十一）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預期用途、試驗方法、檢測結果解釋以及注意事項等重要信息，是指導使用人員正確操作、臨床醫(yī)生準確理解和合理應用試驗結果的重要技術性文件。產(chǎn)品說明書的格式應符合《關于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014第17號）的要求。下面對尿素測定試劑說明書的重點內(nèi)容進行詳細說明。

1.【產(chǎn)品名稱】

通用名稱應當按照《體外診斷試劑注冊管理辦法》規(guī)定的命名原則進行命名，可適當參考相關“分類目錄”和/或國家標準及行業(yè)標準。

例如：尿素測定試劑盒（酶偶聯(lián)監(jiān)測法）。

2.【包裝規(guī)格】

注明可測試的樣本數(shù)或裝量，如××測試/盒、××人份/盒、××mL，除國際通用計量單位外，其余內(nèi)容均應采用中文進行表述。如產(chǎn)品有不同組分,可以寫明組分名稱。如有貨號，可增加貨號信息。

2.1包裝規(guī)格應明確單、雙試劑類型；

2.2不得多于技術要求中所列的包裝規(guī)格；

2.3如不同包裝規(guī)格有與之特定對應的機型，應同時明確適用機型。

3.【預期用途】

應至少包括以下幾部分內(nèi)容：

3.1尿素測定試劑盒用于體外定量檢測人血清或血漿尿素的濃度；

3.2應明確與目的檢測物相關的臨床適應癥背景情況。尿素異常情況常見于哪些疾病，其升高或降低可能有哪些醫(yī)學解釋。

作為支持性資料，申請人應提供由教科書、臨床專著、核心期刊文獻或英文SCI文獻等有關臨床適應癥背景的資料。

4.【檢驗原理】

應結合產(chǎn)品主要成分簡要說明檢驗的原理、方法，必要時可采取圖示方法表示。

5.【主要組成成分】

應明確以下內(nèi)容：

試劑盒提供的試劑組分的名稱、數(shù)量、每個組成成分在反應體系中的比例或濃度。

如檢測中需使用校準品或質控品，應明確說明其生物學來源、活性及其他特性，并提供校準品溯源性，溯源性應寫明溯源的最高級別，包括標準物質或參考物的發(fā)布單位及編號，質控品應明確靶值范圍等。

對于多組分試劑盒，明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

如盒中包含耗材，應列明耗材名稱、數(shù)量等信息。如塑料滴管、封板膜、自封袋等。

對于產(chǎn)品中不包含，但對該試驗必需的試劑組分，說明書中應列出此類試劑的名稱、純度，提供稀釋或混合方法及其他相關信息。

例如：

本試劑盒由試劑1、試劑2和校準品組成：

試劑1：Tris緩沖液，115mmol/L；二磷酸腺苷，1.5mmol/L；α-酮戊二酸，7.5mmol/L；還原型輔酶Ⅰ，0.35mmol/L；谷氨酸脫氫酶， ＞800U/L。

試劑2：Tris緩沖液，115mmol/L；尿素酶，＞40000U/L；α-酮戊二酸，7.5mmol/L。

試劑盒如果配備校準品，需注明校準品定值信息及溯源性。試劑盒如果配備質控品，需注明質控品靶值范圍。

校準品：含有尿素的人源血清基質，校準品具有批特異性，每批定值，定值見標簽標示，量值可溯源至GBW09174。

6.【儲存條件及有效期】

6.1應明確未開封的試劑實際儲存條件及有效期，開瓶穩(wěn)定期。干粉試劑應明確復溶穩(wěn)定期。

6.2說明產(chǎn)品的儲存條件，如：2～8℃、避免／禁止冷凍或-18℃以下等。其他影響穩(wěn)定性的條件，如：光線、濕度等也必須說明。

6.3如試劑盒各組分的穩(wěn)定性不一致，則應對各組分的儲存條件和有效期分別進行描述。

7.【適用儀器】

說明可適用的儀器及型號，并提供與儀器有關的信息以便用戶能夠正確選擇使用。

8.【樣本要求】

重點明確以下內(nèi)容：

樣本類型、為保證樣本各組分穩(wěn)定所必需的抗凝劑或保護劑等、保存期限及保存條件（短期、長期），能夠保證樣本穩(wěn)定的儲存、處理和運輸方法、已知的干擾物等。如有血漿樣本，應注明對抗凝劑的要求，應明確避免使用的提示。

9.【檢驗方法】

詳細說明試驗操作的各個步驟，包括：

9.1試劑配制方法、注意事項。

9.2試驗條件：溫度、時間、測定主/副波長、試劑用量、樣本用量、測定方法、反應類型、反應方向、反應時間等以及試驗過程中的注意事項。

9.3校準程序（如果需要）：校準品的使用方法、注意事項、校準曲線的繪制。

9.4質量控制程序：質控品的使用方法、對質控結果的必要解釋以及推薦的質控周期等。

9.5檢驗結果的計算：應明確檢驗結果的計算方法。包括對每個系數(shù)及對每個計算步驟的解釋。如果可能，應舉例說明。

如果超出線性范圍，樣本需要稀釋測定時，應根據(jù)試劑特性說明稀釋液的種類及最大稀釋倍數(shù)。

10.【參考區(qū)間】

應注明常用樣本類型及反應方式的參考區(qū)間，并說明參考區(qū)間確定方法。注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考區(qū)間”。

11.【檢驗結果的解釋】

說明可能對檢驗結果產(chǎn)生影響的因素。說明在何種情況下需要進行確認試驗。

12.【檢驗方法的局限性】

說明該檢驗方法的局限性，如：存在的干擾因素，明確黃疸、溶血、脂血及藥物等內(nèi)、外源性干擾物對測定的影響，同時列出干擾物的具體濃度。

13.【產(chǎn)品性能指標】

至少應詳述以下性能指標，性能指標應不低于標準有關技術指標的要求。

13.1外觀；

13.2試劑空白吸光度及試劑空白吸光度變化率；

13.3分析靈敏度；

13.4準確度；

13.5精密度（批內(nèi)和批間差）

13.6線性范圍（線性相關系數(shù)和線性偏差）。

14.【注意事項】

應至少包括以下內(nèi)容：

14.1本試劑盒僅供體外檢測使用，試劑中含有的化學成分應說明接觸人體后產(chǎn)生不良的影響后果。

14.2采用不同方法學的試劑檢測所得結果不應直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學解釋；建議實驗室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報告注明所用試劑特征。

14.3有關人源組分的警告，如：試劑盒內(nèi)的質控品、校準品或其他人源組分，雖已經(jīng)通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項目的檢測，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應將這些組分作為潛在傳染源對待。

14.4樣本：對所有樣本和反應廢棄物都應視為傳染源對待。

14.5其他有關尿素測定的注意事項。

三、審查關注點

（一）關注產(chǎn)品預期用途有關的描述是否與臨床研究結論一致。臨床研究用參比試劑和第三方確認試劑的預期用途應與申請產(chǎn)品預期用途一致。申報樣本類型應在臨床研究中進行驗證。

（二）審查產(chǎn)品技術要求時應注意產(chǎn)品應不低于YY/T 1201-2013《尿素測定試劑盒（酶偶聯(lián)監(jiān)測法）》的有關規(guī)定。

（三）說明書中預期用途（樣本類型）、儲存條件及有效期、檢驗方法、參考區(qū)間、產(chǎn)品性能指標等描述應分別與臨床研究資料、穩(wěn)定性研究資料、主要生產(chǎn)工藝和反應體系研究資料、參考區(qū)間研究資料、分析性能評估資料的研究結論相一致。

（四）干粉試劑應提供復溶穩(wěn)定性研究資料并在說明書儲存條件及有效期中說明。

四、編寫單位

河北省醫(yī)療器械與藥品包裝材料檢驗研究院。